AF 488偶联试剂盒样品制备及操作步骤

偶联试剂盒的特点是备齐各种用品使用更方便，效率经过优化后更高，可以直接制备得到一个完整的亲和层析柱。

AF 488标记试剂盒提供了一种简单快速的方法标记抗体、蛋白质、多肽等含有游离氨基的样本。该试剂盒设计用于直接从含有游离氨基的蛋白质、肽和其他配体制备488，应用于偶联标记

艾美捷AF 488偶联试剂盒：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

AF 488偶联试剂盒样品制备：

待标记样品的初始浓度应高于2 mg/mL。提示蛋白浓度在2.5mg/mL以上。否则，在实验之前需要增加蛋白质浓度。待标记样品的成分（或储存缓冲液）应符合以下要求：

（1） 不要含有氨基成分，否则会影响偶联效果。

（2） 少量BSA不会影响偶联效果。建议使用PBS作为存储缓冲液。

（3） 如果样品中含有可能干扰标记的物质，建议用PBS代替缓冲液。具体方法如下

将样品加入超滤膜中，加入200-150?L PBS。在12000 g、4°C、10分钟的温度下离心，然后滤出滤液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分钟下离心。离心后，取出超滤管的内芯，将其置于干净的外管中，并在4000g，4℃，2分钟下离心以收集样品。

待标记样品的成分（或储存缓冲液）要求清单：

注：请根据实际样品体积，放大或缩小试剂盒各成分在反应系统中的体积。（例如FlyLink? AF 488标签套件）

不同规格的推荐合适标签样本量和标签系统如下：

Size    Amount of Sample    Optimal Labeling System

3 ×100 ?g     3×100 ?g       3×50-3×75 ?L

1 mg         1 mg         500-750 ?L

以下操作步骤基于3×100?g规格。对于其他规格，请相应地调整日期。如果您需要调整音量，请保持样本大小不变，并更改FlyLink的音量? AF 488标签解决方案，Activated FlyLink? AF 488溶液和去离子水。1.添加15?L FlyLink? AF 488将溶液标记到待标记的样品溶液中，并用移液管轻轻混合。2.移液管7.5?L活性FlyLink? AF 488溶液加入步骤1中的反应溶液中，加入去离子水至150?L（注：此体积为标记系统），轻轻混合，并在37°C的黑暗中静置1小时。

注：步骤1/2属于标记步骤。

3.向步骤2中的反应溶液中加入适量PBS（固定体积约为500?L），轻轻混合，将溶液移至纯化柱中。在4°C下以12000 g离心10分钟。

4.丢弃滤液，向纯化柱中加入适量PBS（固定体积约500?L）。在4°C下以12000 g离心10分钟。

5.取出纯化柱，将其倒置在干净的离心管中，在4000g下离心2分钟4°C。离心管中收集的溶液为偶联产物。

注：步骤3/4/5为纯化步骤。该缀合物在4°C的黑暗中可以稳定一个多月。为了长期保存，缀合物应装在小份中，置于-20°C的黑暗中，并加入一定体积的甘油。避免重复冷冻和解冻。

Biogradetech全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。