QA-Bio/艾美捷Endo F多酶试剂盒的应用及使用说明

Endo F多酶试剂盒推荐用于去糖基化那些在非变性条件下对PNGase F切割有抵抗力的天然蛋白质，这是由于糖链在蛋白质三维结构中的位置，这些酶被认为对蛋白质构象的敏感性较低。

每种酶具有不同的N-连接糖链特异性：

内切糖苷酶F1切割高甘露糖和一些混合型N-糖链

内切糖苷酶F2释放双天线和高甘露糖糖链（速率降低40倍）

内切糖苷酶F3将释放三天线和岩藻糖化的双天线N-糖链

艾美捷QA-Bio-Endo F多酶试剂盒应用：

去糖基化对PNGase F切割有抵抗力的天然蛋白质

确定糖链类型（高甘露糖、双天线、三/四天线）

去糖基化通常在去糖基化时沉淀的蛋白质

X射线晶体学

这三种酶在糖链核心的两个GlcNAc残基之间切割天冬酰胺连接（N-连接）的寡糖，生成一个截断的糖分子，保留一个N-乙酰葡萄糖胺残基在天冬酰胺上，增强了蛋白质的溶解性。与此相反，PNGase F完整地移除寡糖。

QA-Bio-Endo F多酶试剂盒使用说明：

向Eppendorf管中添加Z多200微克的糖蛋白。用去离子水调整至34微升的最终体积。

添加10微升Endo F2/F3 5倍反应缓冲液，250 mM 醋酸钠 pH 4.5。如果单独使用Endo F1酶，请使用Endo F1缓冲液，250 mM 磷酸钠 pH 5.5。

向反应中添加每种酶2.0微升。在37°C下孵育3小时。 通过SDS-PAGE监测切割情况。

QA-Bio-Endo F多酶试剂盒文献参考：

Maley P., R. B. Trimble, A. L. Tarentino and T. H. Plummer Jr. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of endoglycosidases. Anal Biochem 180:195-204 (1989).

Plummer, T. H. Jr, A. W. Phelan and A. L. Tarentino. Porcine fibrinogen glycopeptides: substrates for detecting endo-N-acetylglucosaminidases F2 and F3. Anal Biochem 235:98-101 (1996).

Tarentino A. L., G. Quinones, L. M. Changchien, and T. H. Plummer Jr. Multiple endoglycosidaseF activities expressed by Flavobacterium meningosepticum endoglycosidases F2 and F3: Molecular cloning, primary sequence, and enzyme expression. J Biol Chem 268(13):9702-9708 (1993).

Tarentino A. L. and T. H. Plummer Jr. Substrate specificity of Flavobacterium meningosepticum: Endo F2 and endo F3: purity is the name of the game. Glycobiology 4:771-773 (1994).

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