聚集体是聚集的、错误折叠的蛋白质形成的包涵体,当泛素-蛋白酶体蛋白质降解机制不堪重负时,它们就会形成。通常,聚集体是在细胞应激反应下形成的,并提供了一种通过隔离错误折叠的蛋白质来保护细胞的机制,最终通过自噬作用清除这些蛋白质。蛋白质聚集体的形成还是多种人类疾病的特征,如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症或酒精性肝病。
本试剂盒中包含的PROTEOSTAT聚集体检测试剂是一种分子转子染料。在溶液中,沿着单个中心键的自由内旋转阻止了荧光。PROTEOSTAT染料特别能够插入到通常在错误折叠和聚集的蛋白质中发现的四聚体蛋白结构的交叉β脊柱中,这将抑制染料的旋转并导致强烈的荧光。
PROTEOSTAT聚集体检测试剂盒提供了一种快速、特异性和定量的方法来标记细胞中的聚集体,消除了对人工蛋白质突变的需求。PROTEOSTAT染料已在广泛的条件下以及与小分子调节剂一起进行了验证,证明了其适用于化合物筛选。此外,它还适用于多重共免疫荧光,以研究自噬和聚集体形成背景下的感兴趣目标。
艾美捷PROTEOSTAT聚集体检测试剂盒(ENZ-51035-0025):
应用:流式细胞术、荧光显微镜、荧光检测。
应用说明:PROTEOSTAT 聚集体检测试剂盒的检测方法可能适用于识别抑制聚集体形成的小分子,以及在聚集蛋白质货物和涉及聚集体形成的各种蛋白质(如组蛋白去乙酰化酶6、帕金蛋白、共济失调蛋白3、动力蛋白复合体和泛素蛋白-1)之间的免疫定位研究。
质量控制:每个批次的PROTEOSTAT 聚集体检测试剂盒的样本被用来对Jurkat细胞进行染色,并通过流式细胞术进行分析,使用用户手册中描述的程序。样本的聚集体活性因子(AAF)值大于25。
数量:对于 ENZ-51035-0025:25次流式细胞术检测或50次显微镜检测。
对于 ENZ-51035-K100:100次流式细胞术检测或200次显微镜检测。
使用/稳定性:在适当的储存条件下,试剂盒组分从收货日期起稳定一年。
处理:避光保护。避免反复冻融。
运输:使用蓝冰。
短期储存:-20°C。
长期储存:-80°C。
内容物:
PROTEOSTAT?聚集体检测试剂、
Hoechst 33342 核染色剂、
蛋白酶体抑制剂(MG-132)、
10X 检测缓冲液。
PROTEOSTAT聚集体检测试剂盒特色:
提供了一种敏感的基于细胞的药物反应性检测,用于在真实的细胞环境中识别与神经退行性疾病相关的抑制剂。
可靠且简单的检测不需要非生理性的蛋白质突变或遗传工程化的细胞系。
在广泛的条件和小分子调节剂下进行了验证,证明了其适用于筛选具有潜在治疗价值的化合物。
固定细胞检测优化了抗体共定位研究。
通过流式细胞术容易量化聚集体和相关包含体。
适用于神经退行性疾病、肝病、毒理学研究等众多领域的研究。
α-syn混合物在细胞质膜上形成聚集体,这些聚集体被内化为M17神经母细胞瘤细胞系。用α-syn单体(M)、超声处理的α-syn PFFs(F)或α-syn混合物(M+F)处理M17细胞。4天后,M17细胞在固定前洗涤3次,然后用PROTEOSTAT?聚集染料(绿色)染色,并对α-syn(红色)和β-catenin(灰色)进行免疫染色。比例尺=20?m。经“纤维蛋白生长和播种能力在α-突触核蛋白介导的凋亡细胞死亡中起关键作用”作者许可使用的图像。A-L Mahul Mellier等人;细胞死亡与分化(2015)。(doi:10.1038/cdd.205.79)。
PROTEOSTAT聚集体检测试剂盒文献参考:
Cyclophilin A supports translation of intrinsically disordered proteins and affects haematopoietic stem cell ageing: L. Maneix, et al.; Nat. Cell Biol. 265, 593 (2024)
Immunofluorescence and Aggresome Staining of Nothobranchius furzeri Cryosections: S. Bagnoli, et al.; Cold Spring Harb. Protoc. (2023)
Immunofluorescence and Aggresome Staining of Nothobranchius furzeri Cryosections: S. Bagnoli, et al.; Cold Spring Harb. Protoc. 2023, 693 (2023)
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