Jena bioscience--T4 DNA Ligase无缝DNA连接和生物技术应用工具

T4 DNA连接酶催化在双链DNA或RNA中相邻的5'磷酸和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键。

艾美捷T4 DNA Ligase：

货号：EN-149L

单位定义：一个Weiss单位被定义为在37°C下20分钟内催化1纳摩尔的32P从焦磷酸盐转移到ATP，并转化为Norit吸附不了的物质的酶的量。

适用于一般实验室使用。

运输：在凝胶包装上运输

储存条件：在-20°C下储存

附加储存条件：避免冻融循环

保质期：12个月

形态：液体（提供时含10 mM Tris-HCl pH 7.4，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，200 ?g/ml BSA和50% [v/v]甘油）

浓度：2.5 Weiss单位/微升（500 CE单位/微升）

T4 DNA Ligase内容：

标准连接缓冲液，10倍浓度。

25°C时500 mM Tris-HCl pH 7.8，100 mM MgCl2，100 mM DTT，10 mM ATP和25 ?g/ml BSA

快速连接缓冲液，2倍浓度。

25°C时60 mM Tris-HCl pH 7.8，20 mM MgCl2，20 mM DTT，2 mM ATP和10% PEG

连接缓冲液中的白色沉淀是正常的，不影响反应效率。不要加热缓冲液，因为这会破坏其中的ATP。

热灭活：

T4 DNA连接酶可以通过在65°C下孵育10分钟来灭活。

注意：

一个粘性末端连接单位（CEU）被定义为在16°C下，1x T4 DNA连接酶反应缓冲液中，30分钟内，20微升总反应体积中，使λ DNA的Hind III片段（5' DNA末端浓度为0.12微摩尔，300微克/毫升）连接50%所需的酶量。

一个Weiss单位大约相当于200个CE单位。

如果NaCl或KCl的浓度超过200 mM，T4 DNA连接酶将受到强烈抑制。

连接平端和单碱基突出的片段需要大约50倍的酶量才能达到与粘性末端DNA片段相同的连接程度。通过添加PEG 4000（最终浓度为10% w/v）或六亚甲基氯化物，或将ATP浓度降低到50微摩尔，可以增强平端连接。

为了稀释T4 DNA连接酶以便在-20°C下储存，应使用含有50%甘油的储存缓冲液；为了稀释连接酶立即使用，建议使用1x反应缓冲液。