PI4K活性ELISA检测设计&检测结果

PI4激酶活性检测是一种竞争性酶联免疫吸附试验（ELISA），其信号与测量到的PI(4)P的数量成反比。在加入PI(4)P检测试剂之前，使用EDTA停止酶反应。然后将这种混合物转移到PI(4)P检测板进行竞争性结合。使用过氧化物酶标记的二抗和比色法检测来检测PI(4)P检测试剂与板结合的数量。

磷脂酰肌醇4-磷酸（PI(4)P）是在哺乳动物细胞中发现的最多的单磷酸磷脂酰肌醇。它由磷脂酰肌醇4-激酶（PI4K）产生，该激酶磷酸化磷脂酰肌醇的肌醇环的D-4位置。根据它们的分子质量、由去污剂和腺苷的调节，PI 4-激酶被分类为两种类型，II型和III型。II型PI 4-激酶包括PI4KIIa（PI4K2A），它参与了许多生物过程，从细胞生长到内吞和外排。它还是肿瘤生长的新调节器，并在高尔基体内产生富含PtdIns4P的区域。PI4KIIb（PI4K2B）主要是胞质的，它被招募到膜上并刺激PI(4,5)P2的合成。III型PI 4-激酶，PI4KIIIa（PI4K3A），在丙型肝炎病毒复制中发挥作用。这些病毒利用PI4KIIIa产生富含PI(4)P的环境，增加细胞中PI(4)P的水平。PI4KIIIb（PI4KB）在有丝分裂期间调节高尔基体的重组。由于其调节分泌颗粒释放的能力，这种酶对于葡萄糖诱导的胰岛素分泌至关重要。所有这些都使PI 4-激酶成为一系列生物功能、疾病状态和感染的有趣靶标。

PI4激酶活性测定被设计用于检测和定量PI4-激酶反应的最终产物PI（4）P。

艾美捷PI4K活性ELISA（#EEB-K-4000K）：

分类：试剂盒与检测

筛选：活性，激酶

运输温度：根据目的地使用干冰和/或凝胶冰运输——产品可能分两个盒子运输

储存：第一部分在4-8°C下储存；第二部分在-80°C下储存

PI4K活性ELISA检测设计：

Echelon公司的PI 4-激酶活性ELISA（酶联免疫吸附试验）旨在检测并定量PI 4-激酶反应的最终产物，即PI(4)P。PI4-激酶活性ELISA是一种竞争性ELISA，其信号与测量到的PI(4)P的数量成反比。在加入PI(4)P检测试剂之前，使用EDTA停止酶反应。然后将这种混合物转移到PI(4)P检测板进行竞争性结合。使用过氧化物酶标记的二抗和比色法检测来检测PI(4)P检测试剂与板结合的数量。

PI4K活性ELISA检测结果：

PI4-激酶活性可以通过将含有酶反应产物的孔的吸收值与标准曲线中的值进行比较来估计。将获得的吸光度值与PI（4）P的log（以pmol为单位）/标准进行绘图，以使用S型剂量-反应（可变斜率）相关性生成标准曲线。通过从酶反应获得的吸光度值进行插值，确定pmol中的PI（4）P水平。见下图。

左图：用GraphPad软件进行非线性回归分析，生成PI（4）P标准曲线。采用对数（激动剂）与响应——可变斜率（四参数）分析。为了获得Z佳结果，使用0 pmol PI（4）P和空白对照。

右图：反应在室温下进行3小时，用0.33mg/mLPI底物（K-4001K）和1.11mATP振荡。

PI4K活性ELISA文献参考：

1. Jiang, X. et. al. 2022. Targeting PI4KA sensitizes refractory leukemia to chemotherapy by modulating the ERK/AMPK/ OXPHOS axis. Theronostics 12: 6972-6988.

2. Sun, A. et. al. 2003. PPhosphatidylinositol 4-kinase IIIβ mediates contraction-induced GLUT4 translocation and shows its anti-diabetic action in cardiomyocytes. Cellular and Molecular Life Sciences