Ultra超敏-小鼠白蛋白试剂盒的操作要点与数据分析

ALB检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量小鼠的ALB生物样本。如果ELISA要在预期用途之外使用，用户可能需要优化所述使用。

艾美捷小鼠白蛋白ELISA试剂盒（E-90AL）检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理在图1中表示。在这种测定中，样品中存在的白蛋白（ALB）与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗ALB抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗ALB抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的ALB形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中ALB的浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中ALB浓度的量度。测试样品中ALB的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

未提供的所需材料：

精密移液器（2微升至100微升），用于制备和分发稀释液

试管

喷雾瓶或微孔板洗涤器/抽吸器

蒸馏水或去离子水

微孔板读取器

用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

样本收集用的离心机

血浆收集用的抗凝剂

计时器

小鼠白蛋白ELISA试剂盒样本收集和处理：

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。处理和处置时遵循通用预防措施。

如果血液样本出现凝固、严重溶血、脂血，或样本完整性受到质疑，请做记录并谨慎解释结果。

以下列出的样本收集和储存条件仅供参考。尚未评估样本稳定性。

血清样本 - 应通过静脉穿刺收集血液。血凝块形成后通过离心分离血清。取出血清并立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

尿液样本 - 使用无菌或干净的尿液收集器收集中段尿液。离心以去除细胞碎片。立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样本稀释：

测定要求在测试前对每个测试样本进行稀释。每次进行测定时，所有样本都应以双份进行测定。推荐的稀释只是建议。稀释应基于未知样本的预期浓度，使稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本水平，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样本进行系列稀释。

血清样本 - 推荐的起始稀释为1/500,000。要准备1/500,000的样本稀释，将2微升的样本转移到1998微升的1倍稀释液中。这给出1/1,000的稀释。接下来，将1/1,000的样本通过转移2微升到998微升的1倍稀释液中进行稀释。这产生1/500,000的稀释。每个阶段都要彻底混合。

血浆样本 - 推荐的起始稀释为1/500,000。要准备1/500,000的样本稀释，将2微升的样本转移到1998微升的1倍稀释液中。这给出1/1,000的稀释。接下来，将1/1,000的样本通过转移2微升到998微升的1倍稀释液中进行稀释。这产生1/500,000的稀释。每个阶段都要彻底混合。

尿液样本 - 推荐的起始稀释为1/500。要准备1/500的样本稀释，将2微升的样本转移到998微升的1倍稀释液中。这给出1/500的稀释。彻底混合。

小鼠白蛋白ELISA试剂盒试剂准备：

使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。

稀释液浓缩液 - 提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）稀释1/5。

洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）稀释1/20。浓缩液在储存温度较低时可能会形成晶体。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。

酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条中添加10微升酶-抗体结合物到990微升1倍稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释，并避光保存。均匀但轻柔地混合。避免起泡。

预涂覆ELISA微孔板 - 按提供状态使用。打开箔袋，从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有的条和孔，放回袋中并重新密封，连同干燥剂。

小鼠ALB校准液 - 根据批次特定的分析证书进行准备。