检测程序丨ICL人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA试剂盒

Alpha 1-抗胰蛋白酶（Alpha-1 Antitrypsin，简称AAT）是一种由肝脏合成的血浆蛋白，它在人体中扮演着重要的保护角色，主要功能是抑制多种胰蛋白酶和其他蛋白水解酶的活性，从而保护肺部组织不受这些酶的破坏。

Alpha 1-抗胰蛋白酶在临床上的应用非常广泛，它不仅用于治疗与AAT缺乏相关的肺部疾病，如非典型肺炎、囊性纤维化和慢性阻塞性肺病，还可以用于治疗其他一些疾病，如肝脏疾病和自身免疫性疾病。此外，Alpha 1-抗胰蛋白酶的浓度测定也是临床上评估肝脏功能和诊断AAT缺乏症的重要指标。

在实验室研究中，Alpha 1-抗胰蛋白酶也被用作生物标记物，用于研究炎症反应、肺纤维化和肿瘤发展等生物学过程。

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA试剂盒双抗体夹心ELISA的原理如图1所示。在该测定中，样品中存在的α1-抗胰凝乳蛋白酶（CYT）与抗CYT抗体反应，抗CYT抗体已吸附到聚苯乙烯微量滴定孔的表面。通过洗涤除去未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗CYT抗体。这些酶标记的抗体与先前结合的CYT形成复合物。在另一个洗涤步骤之后，通过添加显色底物3,3'，5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附剂结合的酶。结合酶的数量直接随测试样品中CYT的浓度而变化；因此，450 nm处的吸光度是测试样品中CYT浓度的量度。测试样品中的CYT量可以从标准品构建的标准曲线中进行插值，并针对样品稀释度进行校正。

艾美捷人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA试剂盒：

货号  E-80CYT

抗体类型 酶联免疫吸附试验

反应性 人类

宿主 山羊

特异性/目标 Alpha 1-抗胰蛋白酶

尺寸 1.0

检测范围 6.25 纳克/毫升 - 400 纳克/毫升

灵敏度 2.518纳克/毫升

测定时间 80 分钟

样品类型 血浆、血清

贮存 2-8℃

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA试剂盒组件：

抗体包被的微孔板

酶结合物检测抗体

校准剂

稀释液浓缩液

洗涤液浓缩液

色原-底物溶液（3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB））

停止液

人Alpha1-抗胰凝乳蛋白酶ELISA试剂盒检测程序：

1. 所有样品和标准品应以重复两次的方式进行检测。

2. 应尽快将标准品和待测样品加载到ELISA孔中，以避免吸光度（OD）读数发生偏移。使用多通道移液器可以减少这种情况的发生。分别以重复两次的方式移液100微升以下标准品：

- 标准品0（0.0 ng/mL）

- 标准品1（6.25 ng/mL）

- 标准品2（12.50 ng/mL）

- 标准品3（25 ng/mL）

- 标准品4（50 ng/mL）

- 标准品5（100 ng/mL）

- 标准品6（200 ng/mL）

- 标准品7（400 ng/mL）

3. 将100微升的样品（重复两次）移液至预先指定的孔中。

4. 在室温下孵育微孔板六十（60 ± 2）分钟。孵育过程中保持板盖覆盖并保持水平。

5. 孵育后，抽吸孔中的内容物。

6. 用适当稀释的洗涤液完全填充每个孔，然后抽吸。重复三次，总共进行四次洗涤。如果手动洗涤：用洗涤缓冲液完全填充孔，倒转板子然后将内容物倒入废液容器中。随后在吸水纸上猛烈敲击孔以去除残留缓冲液。重复三次，总共进行四次洗涤。

7. 向每个孔中移液100微升适当稀释的酶-抗体结合物。在室温下孵育十五（15 ± 2）分钟。孵育过程中保持板盖覆盖并保持水平。

8. 如步骤5/6所述进行洗涤和拍干孔。

9. 向每个孔中移液100微升TMB底物溶液。

10. 在黑暗中室温孵育精确五分钟。

11. 五分钟后，向每个孔中加入100微升停止液。

12. 在30分钟内测定每个孔内容物的吸光度（450纳米）。根据制造商的规格校准板阅读器。