在此检测中,样品中的C-反应蛋白(CRP)与已吸附在聚苯乙烯微孔板表面上的抗CRP抗体发生反应。经过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗CRP抗体。这些酶标记的抗体与先前结合的CRP形成复合物。经过另一次洗涤后,通过加入一种显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来测定与免疫吸附剂结合的酶。结合酶的数量与样品中CRP的浓度成正比;因此,在450 nm处的吸光度是测试样品中CRP浓度的一种测量。测试样品中的CRP数量可以通过从标准品构建的标准曲线进行插值,并校正样品稀释来得出。
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牛 CRP ELISA 试剂盒 | E-10CRP | 查看 |
分析程讯:
1. 所有样品和标准品应该进行双重测定。
2. 标准品和测试样品应尽快装入ELISA孔中,以避免吸光度读数的偏移。使用多通道移液器可以减少这种情况发生。将标准品0(0.0 ng/mL)分别移液100 μL标准品1(1.57 ng/mL)分别移液100 μL标准品2(3.13 ng/mL)分别移液100 μL标准品3(6.25 ng/mL)分别移液100 μL标准品4(12.50 ng/mL)分别移液100 μL标准品5(25 ng/mL)分别移液100 μL标准品6(50 ng/mL)分别移液100 μL标准品7(100 ng/mL)分别移液100 μL。
3. 将100 μL样品(双重)移液到预先指定的孔中。
4. 将微孔板在室温下孵育六十(60 ± 2)分钟。在孵育过程中保持盖子覆盖并水平放置。
5. 孵育后,吸出孔中的内容。
6. 用适当稀释的洗涤溶液完全填满每个孔并吸出。重复三次,总共四次洗涤。如果手动洗涤:用洗涤缓冲液完全填满孔,倒置板然后将内容倒出/摇动到废弃容器中。然后将孔在吸收纸上猛击,以去除残留的缓冲液。总共重复3次,总共四次洗涤。
7. 向每个孔中移液100 μL适当稀释的酶-抗体结合物。在室温下孵育三十(30 ± 2)分钟。在孵育过程中保持盖子覆盖且水平放置。
8. 按照步骤5/6中描述的方法洗涤和吸干孔中的液体。
9. 将100 μL TMB底物溶液移液到每个孔中。
10. 在黑暗中在室温下精确孵育十(10)分钟。
11. 十分钟后,向每个孔中加入100 μL停止溶液。
12. 在30分钟内测定每个孔中的吸光度(450 nm)。校准读板器至制造商规格。
组成:
试剂盒及其组分的过期日期已在盒子标签上注明。如果按照此试剂盒协议插入的存储和使用方式,所有组分应在过期日期前保持稳定。
ICL致力于为生命科学界生产高质量的抗体、ELISA试剂盒和蛋白质参考标准品。通过内部开发和制造产品,使用内部金标准对照进行验证和产品发行,ICL在从抗原生产和抗体选择到即用型试剂盒设计的所有方面都保持完全的自主权。虽然ICL的产品仅供研究使用,但无数的ICL抗体已成为基本体外诊断(IVD)测试的核心成分。这证明了ICL的客户对我们的信任,其中包括许多世界高知名度的体外诊断制造商。
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