Digoxigenin-11-dUTP被酶促掺入DNA/cDNA中作为其天然对应物dTTP的替代物。随后使用与辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷酸酶(AP)或荧光染料缀合的洋地黄毒苷抗体检测所得的洋地黄毒苷标记的DNA/cDNA探针。通过连接到尿苷C5位的a11原子接头确保了最佳的底物性质和标记效率。推荐用于PCR和切口翻译的洋地黄毒苷-11-dUTP/dTTP比率:35%洋地黄毒苷-11-dUTP/65%dTTP
请注意:洋地黄毒苷-11-dUTP的最佳终浓度可能很大程度上取决于应用和测定条件。为了获得最佳的产品收率和高掺入率,建议对洋地黄毒苷-11-dUTP/dTTP比率进行单独优化。
Digoxigenin-11-dUTP结构式
艾美捷Digoxigenin-11-dUTP,地高辛/二硝基苯酚(NU-803-DIGXS):
运输:通过凝胶包进行运输。
存储条件:应在-20°C的环境下保存。
短期(累计最多1周)暴露于室温下是可行的。
保质期:自交货之日起12个月。
分子式:C43H65N4O21P3(自由酸形式)。
分子量:1066.91克/摩尔(自由酸形式)。
精确质量:1066.34克/摩尔(自由酸形式)。
纯度:高于或等于95%(通过高效液相色谱法测定)。
形态:在10 mM Tris-HCl溶液中的过滤溶液,分子量截留30 kDa。
颜色:无色至淡黄色。
浓度:1.0 mM至1.1 mM。
pH值:7.5,误差范围±0.5。
光谱特性:zui大吸收波长λmax为290纳米,摩尔吸光系数ε为8.8 L·摩尔^-1·厘米^-1(Tris-HCl,pH 7.5)。
应用:
生物素-11-dUTP可以通过以下方法嵌入到DNA或cDNA中:
使用Taq聚合酶进行聚合酶链式反应(PCR)。
利用DNA酶I/DNA聚合酶I进行缺口翻译(Nick Translation)。
使用Klenow exo-进行引物延伸(Primer Extension)。
使用末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase,简称TdT)进行3'端标记。
使用MMLV逆转录酶进行逆转录。
此外,生物素-11-dUTP还可以通过以下方法嵌入到RNA中:
使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)进行3'-端标记。
Digoxigenin-11-dUTP,地高辛/二硝基苯酚参考文献:
[1] Anderson et al. (2005) Incorporation of reporter-labeled nucleotides by DNApolymerases. Biotechniques 38:257.
[2] Jackson et. al (1991) Detection of Shiga Toxin-Producing Shigelladysenteriae Type 1 and Escherichia coli by Using Polymerase Chain Reactionwith Incorporation of Digoxigenin-11-dUTP. J Clin Microbiol. 29 (9):1910.
[3] Dauwerse et al. (1999) Two-colour FISH detection of the inv (16) ininterphase nuclei of patients with acute myeloid leukemia. Br J Haematol106:111.
[4] Wiegant et al. (2008) Probe Labeling and Fluorescence In Situ Hybridization.Current Protocols in Cytometry: Unit 8.3.
[5] Schmitz et al. (2008) Nonradioactive labeling of oligonucleotides in vitrowith the hapten digoxigenin by tailing with terminal transferase. Anal Biochem199:222.
[6] Grimmond et al. (2001) Expression Profiling with cDNA Microarray’s: A User’sPerspective and Guide. In: DNA Microarrays: Gene Expression Applications(Jordan). Springer Verlag Berlin Heidelberg
[7] Rosemeyer et al. (1995) Nonradioactive 3’-end-labeling of RNA molecules ofdifferent lengths by terminal deoxynucleotidyltransferase Anal Biochem224:446.
Digoxigenin-11-dUTP,地高辛/二硝基苯酚相关产品:
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