QA-Bio-酶促DeGlycoMx试剂盒特异性&使用说明

酶在20微升或100微升的瓶中预混合。这允许研究人员在变性和天然条件下，快速去除糖蛋白中的大部分糖链（O-连接的粘液除外）。通过将酶组合成一种易于使用的预混合溶液，研究人员在追求蛋白质去糖基化的过程中节省了时间和金钱。这些酶也可以单独提供，每种酶20微升的小瓶装（KE-DG01），允许研究人员更全面地表征附着在糖蛋白上的糖链，而不是使用我们的酶混合物。

艾美捷QA-Bio-酶促DeGlycoMx试剂盒包含一个20微升的小瓶，其中包含以下溶液中的酶：

PNGase F（脑膜败血黄杆菌）

O-糖苷酶（肺炎链球菌）

神经氨酸酶（尿素杆菌）

β-半乳糖苷酶（肺炎链球菌）

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（肺炎链球菌）

其他提供的试剂：

反应缓冲液

变性溶液

Triton X

QA-Bio-酶促DeGlycoMx试剂盒特异性：

Enzymatic DeGlycoMx?试剂盒将从糖蛋白中去除所有N-连接的寡糖和许多O-连接的寡糖。使用酶PNGase F进行N-连接糖链（天冬酰胺连接）的蛋白质去糖基化。此外，所有丝氨酸或苏氨酸连接的（O-连接）Gal-(b1-3)-GalNAc-(a1)以及所有唾液酸替代的Gal-(b1-3)-GalNAc-(a1)将使用神经氨酸酶和O-糖苷酶的组合去除。添加β-半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶将有助于较大O-连接结构的去糖基化。

QA-Bio-酶促DeGlycoMx试剂盒使用说明：

在1.5毫升管中，将10微升的反应缓冲液与高达50微克的糖蛋白混合在33微升的蒸馏水中。

添加2.5微升的变性溶液。轻轻混合，然后在沸水浴中放置5分钟。在冰上冷却。

添加2.5微升的Triton-X。

添加2微升的DeGlycoMx酶混合物。在37°C下孵化3小时。

注意：变性可以将酶消化的速率提高多达10倍。如果不希望变性，省略步骤2-3，用5微升的蒸馏水添加，并把孵化时间增加到24小时。

文献参考：

Kobata, A. Use of endo- and exoglycosidases for structural studies of glycoconjugates. Anal Biochem 100:1- 14 (1979).

Kim MS, Leahy D. Enzymatic deglycosylation of glycoproteins. Methods Enzymol.533:259-63 (2013).

Magnelli PE, Bielik AM, Guthrie EP. Identification and characterization of protein glycosylation using specific endo- and exoglycosidases. J Vis Exp. Dec 26;(58):e3749 (2011).

Segu ZM, Hussein A, Novotny MV, Mechref Y. Assigning N-glycosylation sites of glycoproteins using LC/MSMS in conjunction with endo-M/exoglycosidase mixture. J Proteome Res. Jul 2;9(7):3598-607 (2010).

Sojar, H. T. and O.P. Bahl. A chemical method for the deglycosylation of proteins. Arch Biochem Biophys 259:52-57 (1987).

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