蛋白质羰基含量检测试剂盒试剂&样品制备方案

蛋白质羰基是蛋白质氧化修饰过程中多种氨基酸的早期标志，其含量反映了蛋白质氧化损伤程度，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。原理是羰基基团与2,4-二硝基苯肼反应，生成具有在370 nm处特征吸收峰的红色2,4-二硝基苯肼酮。

艾美捷蛋白质羰基含量检测试剂盒基本信息：

货号：D-AKC1200-96T

规格：: 48T / 96T

储存：在4°C下储存12个月，避光

提供的材料和储存条件：

所需材料但未提供的：

· 可测量370 nm处吸光度的微孔板阅读器或可见光分光光度计

· 孵化器、制冰机、冷藏离心机

· 96孔板或微玻璃比色皿、精密移液器、一次性移液头

· 去离子水、乙醇、乙酸乙酯

· Dounce匀浆器（用于组织样本）

试剂制备：

提取缓冲液：按照提供的使用说明使用即可。使用前应将其平衡至室温。存放于4°C。工作抗氧化剂：根据样本数量制备，取0.1克并用1毫升去离子水溶解，1毫升可用于10个样本。存放于4°C，避光。显色剂：按照提供的使用说明使用即可。使用前应将其平衡至室温。存放于4°C，避光。HCl：按照提供的使用说明使用即可。使用前应将其平衡至室温。存放于4°C。TCA：按照提供的使用说明使用即可。使用前应将其平衡至室温。存放于4°C。盐酸胍：按照提供的使用说明使用即可。使用前应将其平衡至室温。存放于4°C。

样品制备：

1. 动植物组织样品：称取0.1克组织，加入1毫升提取缓冲液，在冰上均质。以4,000 g离心10分钟于4°C。取上清液，加入0.1毫升工作抗氧化剂，室温下静置10分钟，以10,000 g离心10分钟于4°C。使用上清液进行测定，并将其放置在冰上待测。

2. 细胞或细菌：将5×10^6个细胞或细菌收集到离心管中，用冷PBS洗涤细胞或细菌，离心后废弃上清液；加入1毫升提取缓冲液超声破碎细胞或细菌5分钟（功率20%或200瓦特，超声3秒，间隔7秒，重复30次）。以10,000 g离心10分钟于4°C。使用上清液进行测定，并将其放置在冰上待测。

3. 血清（血浆）样本：直接进行测试。

数据分析

注意：我们为您提供了计算公式，包括推导过程和最终公式。两者完全相等。建议使用粗体的简洁计算公式作为最终公式。

A. 96孔板计算公式

1. 根据蛋白质浓度计算

蛋白质羰基含量（μmol/mg蛋白）= [ΔA×V总÷(ε×d)]÷(V样品×Cpr) = 0.454×ΔA÷Cpr

2. 根据样品重量计算

蛋白质羰基含量（μmol/g鲜重）= [ΔA×V总÷(ε×d)]÷(W×V样品÷V总样品) = 0.454×ΔA÷W

3. 根据细胞或细菌数量计算

蛋白质羰基含量（μmol/10^4）= [ΔA×V总÷(ε×d)]÷(500×V样品÷V总样品) = 0.454×ΔA÷500

4. 根据液体体积计算

蛋白质羰基含量（μmol/mL）= [ΔA×V总÷(ε×d)]÷V样品 = 0.454×ΔA

其中：ΔA = A测试 - A对照；V总：总反应体积，0.3 mL；ε：羰基摩尔消光系数，22 L/mmol/cm；d：96孔板直径，0.5 cm；V样品：添加的样品体积，0.06 mL；V总样品：添加的提取缓冲液体积，1 mL；Cpr：样品蛋白质浓度，mg/mL；W：样品重量，g；500：细胞或细菌的总数，5×10^6。

B. 微玻璃比色皿计算公式

上述计算公式中的光学直径 d：可以调整为 d：1 cm 进行计算。

注意：如果基于样品蛋白质浓度的计算方法，建议使用 EZMeta? 蛋白质羰基比色测定试剂盒。

仅供研究使用，不用于人类或临床诊断