EZElisa三碘甲状腺原氨酸(T3) ELISA试剂盒检测原理

三碘甲状腺原氨酸（T3）是诊断甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进的有用标志物。T3水平在甲状腺功能减退患者中降低，在甲状腺功能亢进患者中增加。T3的产生受到来自垂体前叶释放的甲状腺刺激素（TSH）的激活。这条途径是闭环反馈过程的一部分：血浆中T3浓度升高会抑制垂体前叶的TSH产生。随着这些激素浓度的降低，垂体前叶增加TSH的产生，通过这些过程，反馈控制系统稳定了血液中的甲状腺激素水平。EZElisa?游离三碘甲状腺原氨酸（T3）ELISA试剂盒采用竞争性抑制酶免疫测定技术。试剂盒中的微孔板已经预包被了特异性抗T3抗体。将标准品或样品加入到适当的微孔板孔中，加入与生物素偶联的T3。T3（标准品或样品）与预包被的特异性抗T3抗体结合的生物素偶联的T3之间发生竞争性抑制反应。样品中T3的含量越高，与生物素偶联的T3结合的抗体越少。洗涤后，加入过氧化物酶标记的亲和素（Avidin-HRP）到孔中。加入底物溶液，颜色的发展与样品中T3的含量相反。停止颜色的发展，并测量颜色的强度。

艾美捷EZElisa三碘甲状腺原氨酸(T3) ELISA试剂盒基本参数：

目录号：D-AEK0006

规格：48T/96T

储存：未开封的试剂盒应在4°C下保存12个月，并避光

检测范围：0.5 ng/mL-8 ng/mL

灵敏度：0.4 ng/mL

特异性：EZElisa?游离三碘甲状腺原氨酸（T3）ELISA试剂盒具有高灵敏度和优异的特异性，可用于T3的检测。未观察到T3与类似物之间的显著交叉反应或干扰。

适用样本：血清、血浆

供应材料和储存条件：

Note: Std1: 0.5 ng/mL; Std2: 1 ng/mL; Std3: 2 ng/mL; Std4: 4 ng/mL; Std5: 8 ng/mL.

EZElisa三碘甲状腺原氨酸(T3) ELISA试剂盒试剂准备：

注意：使用前将所有试剂平衡至室温。如果缓冲浓缩液中形成了晶体，请轻轻加热，直到它们完全溶解。

1×洗涤缓冲液：洗涤缓冲液（20×）用去离子水1:20稀释，得到1×洗涤缓冲器。在4°C下储存。

样本制备：

1. 血清：使用血清分离管，在室温下使样本凝结30分钟，然后以1,000 g的速度离心15分钟。立即取出血清进行检测，或将样本分装并储存在-20°C。避免反复冻融循环。

2. 血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在采集后30分钟内以1,000 g的速度离心15分钟。立即进行检测，或将样本分装并储存在-20°C。避免反复冻融循环。注意：不要使用明显溶血或脂质血症的标本。如果样本在24小时内使用，可以储存在2到8°C。避免反复冻融循环。在检测前，应缓慢将冷冻样本回温至室温，并轻轻混匀。

程序分析：

1. 从微孔板架上取下多余的微孔板条，放回包含干燥剂包装袋中，并重新密封。

2. 每个孔加入50 μL的T3标准品或样品。建议将所有标准品和样品都以两个孔的形式加入微孔板中。设置一个空白孔，不加入任何溶液。

3. 每个孔加入50 μL的生物素偶联的T3（不加入空白孔）。充分混匀，用提供的孔盖盖上，然后在37°C下孵育1小时。

4. 倒出每个孔中的液体，并进行洗涤，总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动微孔板洗涤器，将每个孔填满1×洗涤缓冲液（250 μL），静置10秒钟，每个步骤完全去除液体对于良好的性能至关重要。最后一次洗涤后，倒转孔板并用干净的纸巾轻轻拍干任何剩余的1×洗涤缓冲液。

5. 每个孔加入50 μL的过氧化物酶标记的亲和素（Avidin-HRP），充分混匀，用提供的孔盖盖上。在37°C下孵育30分钟。

6. 重复第4步中的洗涤过程。

7. 每个孔加入50 μL的底物A和50 μL的底物B，充分混匀，用提供的孔盖盖上。在37°C下孵育15分钟。将孔板放置在无风和其他温度波动的暗处。

8. 每个孔加入50 μL的停止溶液。停止溶液应按照过氧化物酶底物的顺序加入孔板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色是绿色，或者颜色变化不均匀，请轻轻拍打孔板以确保充分混匀。

9. 在30分钟内使用设置为450 nm的微孔板读数仪测定每个孔的光密度。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

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