EZElisa孕酮ELISA试剂盒试剂准备&程序分析

孕酮是一种内源性类固醇和孕激素性激素，参与人类和其他物种的月经周期、妊娠和胚胎发育。它属于一类被称为孕激素的类固醇激素，并且是体内主要的孕激素。孕酮还是合成其他内源性类固醇（包括性激素和皮质类固醇）的重要代谢中间产物，并作为神经类固醇在脑功能中发挥重要作用。EZElisa?孕酮（Pg）ELISA试剂盒采用竞争性抑制酶免疫测定技术。试剂盒中的微孔板已经预包被了抗兔抗体。将标准品或样品加入到适当的微孔板孔中，加入特异性抗孕酮抗体和辣根过氧化物酶（HRP）偶联的孕酮。辣根过氧化物酶标记的孕酮与未标记的孕酮通过与抗体发生竞争性抑制反应。加入底物溶液到孔中，颜色的发展与样品中孕酮的含量相反。停止颜色的发展，并测量颜色的强度。

艾美捷EZElisa孕酮ELISA试剂盒基本参数：

目录号：D-AEK0002

规格：48T/96T

储存：在4°C下储存12个月，避光。

检测范围：0.5 ng/mL-30 ng/mL

灵敏度：0.2 ng/mL

精密度：内部精密度：变异系数（CV）＜15%。间接精密度：变异系数（CV）＜15%

回收率：回收率范围为85%至115%，总体平均回收率为100%

特异性：EZElisa?孕酮（Pg）ELISA试剂盒对孕酮的检测具有高灵敏度和优异的特异性。未观察到孕酮与类似物之间的显著交叉反应或干扰。

适用样本：血清、血浆

供应材料和储存条件：

Note: Std1: 0 ng/mL; Std2: 0.5 ng/mL; Std3: 2 ng/mL; Std4: 6 ng/mL; Std5: 15 ng/mL; Std6: 30 ng/mL.

EZElisa孕酮ELISA试剂盒试剂准备：

注意：使用前将所有试剂平衡至室温。如果缓冲浓缩液中形成了晶体，请轻轻加热，直到它们完全溶解。

1×洗涤缓冲液：将洗涤缓冲液（20×）用去离子水稀释1:20，得到1×洗涤缓冲液。储存在4°C。样品制备

1.血清：使用血清分离管，在室温下凝固样品30分钟，然后以1,000 g的速度离心15分钟。立即使用血清进行检测，或将样品分装并储存于-20°C。避免反复冻融循环。

2.血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂采集血浆。在采集后30分钟内以1,000 g的速度离心15分钟。立即进行检测，或将样品分装并储存于-20°C。避免反复冻融循环。注意：不要使用明显溶血或脂质混浊的样本。如果样品在24小时内使用，可以储存在2至8°C。避免反复冻融循环。在进行检测之前，冷冻样品应缓慢回温至室温，并轻轻混匀。

程序分析：

1. 从板框中取出多余的微孔板条，放回包含干燥剂包的铝箔袋中，并重新密封。

2. 每个孔加入50 μL的孕酮标准品或样品。建议将所有标准品和样品都复制加入微孔板中。设置一个不加任何溶液的空白孔。

3. 向每个孔中加入50 μL的HRP偶联的孕酮（不加入空白孔），然后按照相同的顺序向每个孔中加入50 μL的孕酮检测抗体。充分混匀后，使用提供的板盖覆盖孔板，然后在37°C下孵育1小时。

4. 倒掉每个孔中的液体并进行洗涤，总共重复三次洗涤过程。使用多通道移液器或自动微孔板洗涤器，将每个孔填满1×洗涤缓冲液（250 μL），静置10秒钟，每个步骤完全去除液体对于良好的性能至关重要。在最后一次洗涤后，倒转孔板并在干净的纸巾上轻拍，去除任何剩余的1×洗涤缓冲液。

5. 向每个孔中加入50 μL的底物A和50 μL的底物B，充分混匀并使用提供的板盖覆盖。在37°C下孵育15分钟。将孔板放置在黑暗中，远离气流和其他温度波动。

6. 向每个孔中加入50 μL的停止溶液。停止溶液应按照HRP底物的顺序加入孔板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色是绿色，或者颜色变化不均匀，请轻轻敲击孔板以确保充分混匀。

7. 在30分钟内使用设置为450 nm的微孔板读数器测定每个孔的吸光度。

注：

1.不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合或替换。

2.为了避免交叉污染，在每个标准水平的添加之间和样品之间更换移液管尖端添加以及试剂添加之间。此外，每个试剂使用单独的储液器。

3.为了确保准确的结果，在培养步骤中需要适当粘附板盖。

4.停止溶液具有一定的腐蚀性。操作时请采取防护措施

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

Biogradetech生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。