CryoSol?是一套多组分溶液,用于利用溶解/低温保护混合剂1-6(SM1-SM6)进行配体溶解和浸泡,以及使用CryoMixes? 1-18(CM1-CM18)进行晶体低温保护。SM1-SM6和CM1-CM18的成分包括环己烷和丁二醇以及二甲基亚砜(DMSO)。虽然高浓度的DMSO对蛋白质可能有害,但高浓度的环己烷却能很好地被耐受。环己烷单独使用或与其他具有低温保护性能的有机化合物联合使用时,也非常有效地进行配体溶解。这个试剂盒旨在用于配体溶解,准备蛋白-配体复合物进行共晶筛选。它也适用于准备装载配体的低温溶液,用于浸入晶体。
艾美捷MiTeGen-CryoSol?的特点:
溶解疏水性配体。
轻松准备用于浸泡实验的装载配体的低温溶液。
蛋白配体复合物的共晶筛选。
蛋白友好的二甲基亚砜(DMSO/环己烷/乙二醇)混合剂应改善配体溶解。
包含2,3-丁二醇 - 与酶活性兼容。
来自ICCBM 15海报展示的晶体照片。在不同配体存在下生长的野生型人转甲状腺素(TTR)晶体的显微照片。(A) TTR-16α-溴雌醇复合物的晶体。这些晶体是在较低浓度的PEG条件下生长的。PEG可以参与类固醇的溶解,但浓度的微小变化对配体晶体生长几乎没有影响。(B) 在pH7.4条件下,存在姜黄素时生长的TTR晶体。
二恶烷和二醇对蛋白质不溶性有相反的影响,可以用来改善晶体。在蒸汽扩散实验中,二恶烷增加了储层溶液的沉淀能力。二恶烷-PEG混合物允许单独PEG不能沉淀的蛋白质结晶。二恶烷也是蛋白质结晶中常见的沉淀剂/添加剂。
多组分低温保护剂溶液(CM1-CM18)CryoMixes? CM1-CM18 是一套扩展型多组分溶液(除了在CryoProtX?, MD1-61中提供的之外),用于晶体的低温保护和单步低温浸泡,并且包括了在CryoProtX?中未发现的附加组分,如二恶烷和丁二醇,使这些条件更适合于通常在标准低温溶液中不溶的配体的工作。
配方说明:CryoSol?试剂使用超纯水(>18.0 MΩ)配制,并通过0.22微米过滤器无菌过滤。没有添加防腐剂。可从Molecular Dimensions公司获取用于优化的单独试剂和储备溶液。
MiTeGen-CryoSol文献参考:
Ciccone L, Tepshi L, Nencetti S, Stura EA.N Biotechnol. (2015)“Transthyretin complexes with curcumin and bromoestradiol: Evaluation of solubilizing multicomponentmixtures” 32(1):54-64.
L Vera, EA Stura - Crystal Growth & Design, (2014)“Strategies for Protein Cryocrystallography”,14 (2), 427-435.
Ciccone L., Vera L., Tepshi L., Rosalia L., Rossello A. & SturaE.A. "Multicomponent mixtures for cryoprotection andligand solubilization." Biotechnology Reports 7 (2015): 120-127. Open Access
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