Clostripain(内蛋白酶-Arg-C)是一种与胶原酶相关的双链蛋白酶,从溶组织梭菌中分离出来。它对精氨酸的羧基肽键具有高度特异性。克洛帕因有巯基需求;它被二硫苏糖醇、半胱氨酸或其他含巯基的试剂活化。钙离子的存在是必不可少的。该酶被氧化剂和巯基反应物以及Co2+,Cu2+,Cd2+和重金属离子抑制。柠檬酸盐、硼酸盐和Tris阴离子的抑制作用较小。
作为Worthington全国总代理,艾美捷科技强烈推荐Worthington主要产品Clostripain(内蛋白酶-Arg-C)。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
产品名称 | 货号 | 详情 |
Clostripain(内蛋白酶-Arg-C) | WBC-LS001641 | 查看 |
稳定性/存储:自溶发生在高于40°C的温度下。 该酶在USP 0.2%SDS中完全活跃。在12-2°C下可稳定保存8个月。
测定方案:
方法
反应速度测量为N-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯水解引起的253nm处吸光度的增加。在规定的条件下,一个单位在 25°C 和 pH 7.6 下每分钟水解一微摩尔的 BAEE。
试剂
0.075 M 磷酸钠缓冲液,pH 7.6
7.5 毫米二硫苏糖醇
0.75 mM N-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯 (BAEE)
1.0 mM乙酸钙含有2.5 mM二硫苏糖醇(活化溶液)
酶
将酶溶解或稀释在水中浓度为1mg / ml。在测定之前,将酶进一步稀释在含有1.0mM二硫苏糖醇的2.5mM乙酸钙中至0.2-0.8单位/ ml的浓度。
程序
将分光光度计调整至 253 nm 和 25°C。 按如下方式移液到每个比色皿中:
0.075 M 磷酸盐缓冲液,pH 7.6 | 1.0毫升 |
7.5 毫米桌面转换 | 1.0毫升 |
0.75 毫米贝 | 1.0毫升 |
在分光光度计中孵育3-5分钟以达到温度平衡并确定空白率(如果有)。在零时间,加入0.1ml适当稀释的酶并记录A2534-5分钟。确定 ΔA253/分钟距曲线的线性部分。注意:当ΔA时,反应相对于酶浓度似乎是最线性的253/min 介于 0.007 和 0.030 之间。
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Clostripain(内蛋白酶-Arg-C)部分引用文献:
Gilles, A. , Imhoff, J. and Keil, B.
Chemical Chacterization, Activity, and Thiol Content of the Highly Active Form of Clostripain , J Biol Chem 254 , 1462 , 1979
Gilles, A. , Lecroisey, A. and Keil, B.
Primary Structure of alpha-Clostripain Light Chain , Eur J Biochem 145 , 469 , 1984
Homandberg, G. , Komoriya, A. and Chaiken, I.
Enzymatic Condensation of Nonassociated Peptide Fragments Using a Molecular Trap , Biochemistry 3385 , 3385 , 1982
酶是Worthington的主要产品线。从技术上讲,Worthington实际上并不制造酶,而是从各种动植物组织和各种微生物来源(如细菌、真菌和霉菌)中提取酶。根据该酶在材料中的普遍性选择特定酶的起始材料。例如,一种功能涉及使肌肉工作的酶将主要存在于肌肉组织中,因此起始材料可能是兔肌肉或猪心;参与发酵的酶最好在酵母中找到。 Worthington使用的一些动物组织包括牛胰腺、猪肾、牛眼、马肝、兔肌肉、牛肝、猪心、马血和小牛肠。各种蛋白质也从辣根、红薯、杏仁和美洲商陆中提取。一些产品是从大肠杆菌、几种梭状芽胞杆菌和各种其它细菌中分离出来的。还使用酵母、蘑菇、全脂牛奶和鸡蛋等。
Worthington是一家通过的ISO9001认证的家族企业。主要生产用于生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。作为生命科学领域知名的酶类供应商,以及细胞分离酶的专家级公司,其核心酶产品包括:胶原蛋白酶,脱氧核糖核酸酶I,弹性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。
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