Svar Life Science-PhiCal高灵敏度测量人类粪便中粪便钙卫蛋白浓度

PhiCal?检测是一种定量ELISA，用于测量人类粪便中粪便钙卫蛋白的浓度，一种中性粒细胞蛋白，是粘膜炎症的标志。PhiCal?测试可用作体外测试诊断以帮助诊断炎性肠病（IBD）：克罗恩病和溃疡性结肠炎，并将IBD与肠易激综合征区分开来。

艾美捷Svar Life Science-PhiCal（#CPT400）检测原理：

PhiCal?粪便钙卫蛋白免疫测定是一种酶联免疫吸附测定系统通过比色检测。该测试使用了一种针对钙卫蛋白的多克隆抗体，该抗体与一种酶连接免疫吸附测定系统。稀释样品中存在的钙卫蛋白被吸附的抗体结合到塑料井的表面。酶偶联抗体与捕获的抗原结合随后，酶催化底物转化为有色产物。强度颜色与结合的共轭物的量成正比，因此与捕获的钙卫蛋白的量成比例。使用提供的标准计算样品中钙卫蛋白的浓度。

Svar Life Science-PhiCal试剂盒包含的试剂：

抗体涂层板：12条条带，每条带8个孔，涂有针对钙保护蛋白的抗体。该板存放在密封袋中，并附有干燥剂。

结合物：15毫升碱性磷酸酶标记的免疫亲和纯化IgG抗体（来自兔子），针对钙保护蛋白，溶解在含Proclin 300作为防腐剂的缓冲液中。

底物：1瓶含有15毫升底物的缓冲液。随时可用。

洗涤液：50毫升20倍浓缩液，需要用蒸馏水稀释。

稀释液：20毫升10倍浓缩液，含Proclin 300作为防腐剂，需要用蒸馏水稀释。

提取液：2瓶50毫升的2.5倍浓缩液，含Proclin 300作为防腐剂，需要用蒸馏水稀释。该浓缩液对眼睛和皮肤有刺激性。

校准品：5瓶各含1毫升已知浓度的钙保护蛋白溶液（6.25、12.5、25、50和100 ng/ml），含Proclin 300作为防腐剂。每个标准的值印刷在瓶标签上。

对照品：含Proclin 300作为防腐剂。

对照品1（低浓度）：1瓶含有1.0毫升。随时可用。请勿稀释。该批次的特定范围值印刷在瓶标签上，以ng/ml表示。近似范围 = 20-40 ng/ml 或（50-100 ?g/g）。

对照品2（高浓度）：1瓶含有1.0毫升。随时可用。请勿稀释。该批次的特定范围值印刷在瓶标签上，以ng/ml表示。近似范围 = 45-75 ng/ml 或（112.5-187.5 ?g/g）。

性能特征

水相线性：

水相线性通过稀释Calprotectin参考材料（来自挪威奥斯陆的Magne Fagerhol博士）进行测试。对每个稀释水平进行了三次重复测量。每个水平的平均观察值与相应的预期值进行比较，如下图所示。水相线性的评估表明，该检测在6.25 - 100 ng/ml或15.625 - 250 ?g/g范围内具有可接受的线性和准确性。这项研究还作为第二源标定验证，因为用于标定的标准随试剂盒提供，而用于评估线性的标准则是稀释的纯化第二源材料。

功能灵敏度：

功能灵敏度（FS）与线性数据一起确定了结果准确和精确的最低浓度；低于检测的功能灵敏度的患者结果报告为<FS。为了确定PhiCal?测试的功能灵敏度，使用试剂盒标准品的3个浓度（12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.125 ng/ml）在6天内进行了三次或四次的测定；通过使用稀释缓冲液将6.25 ng/ml的标准品稀释获得3.125 ng/ml水平。每个水平的%CV与其相应的浓度进行绘图。对于测定的浓度3.125 ng/ml，6.25 ng/ml和12.5 ng/ml的准确性和精确性是可接受的。可报告范围将受限于最低校准值：6.25 ng/ml。

在典型的样本稀释比例为1：2500的情况下，6.25 ng/ml相当于每克粪便中的15.6（?g Calprotectin）/（g stool）。

Svar Life Science-PhiCal文献参考：

1. Fagerhol MK, et al. Calprotectin (The L1 leukocyte protein) in: Smith V.L. and Dedman J.R. (eds.): Stimulus response coupling: The role of intracellular calcium-binding proteins. CRC Press, Boca Raton 1990,p.187-210

2. R?seth AG, et al. Assessment of the neutrophil dominating protein calprotectin in feces. A methodologic study. Scand J Gastroenterol 1992;27:793-798.

3. R?seth AG, et al. Correlation between faecal excretion of Indium-111-labelled granulocytes and

calprotectin, a granulocyte marker protein, in patients with inflammatory bowel disease. Scand J

Gastroenterol 1999;34:50-54.

4. Tibble J, et al. A simple method for assessing intestinal inflammation in Crohn’s disease. Gut 2000;47:506-513.

5. Bunn SK, et al. Fecal calprotectin: Validation as a noninvasive measure of bowel inflammation in childhood inflammatory bowel disease. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2001;33:14-22

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