AkrivisBio 结晶紫细胞毒性测定，详细测定方案

结晶紫结合作为细胞毒性的测量是检测细胞活力或药物细胞毒性的一种公认方法。结晶紫是一种三芳基甲烷染料，能与DNA等含有核糖的分子结合。通常，死细胞从细胞培养板上分离，并在洗涤步骤中去除。使用结晶紫来量化剩余粘附细胞群的DNA允许通过监测其在570nm处的吸光度来快速测量细胞活力。

AkrivisBio 的结晶紫细胞毒性试验是一种简单、灵敏的研究细胞增殖、活力或细胞毒性的试验。该测定提供了细胞存活的定量测量，并可用于评估各种治疗或化合物的细胞毒性作用。

艾美捷AkrivisBio 结晶紫细胞毒性测定：

Catalog: CPT-0102

Size: Includes reagents for 1000 wells

Sample Type: Adherent Cells

Species: Non specific

Method of Detection: Colorimetric, OD 570 nm

Assay Type: Quantitative

Application: To study cell proliferation, viability or cytotoxicity.

Range: Recommended 5000-20000 cells/well

Storage Conditions: -20°C

Shipping Temperature: Gel Pack

Shelf Life: One year from the date of delivery

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目录：CPT-0102

尺寸：包括1000#试剂

样品类型：粘附细胞

物种：非特定

检测方法：比色法，OD 570 nm

化验类型：定量

应用：研究细胞增殖、活力或细胞毒性。范围：推荐5000-20000个细胞/孔

储存条件：-20°C

运输温度：凝胶包装

保质期：一年

AkrivisBio 结晶紫细胞毒性测定组成：

结晶紫染色40 ml NM CPT-0102-A

Wash浓缩液115 ml NM CPT-0502-B

溶解液100 ml WM CPT-0102-C

Doxorbicin 100?l红色CPT-0102-D

将未开封的试剂盒储存在-20°C的温度下。在打开之前，对所有小瓶进行短暂离心。

水晶紫染色：使用前加热至RT。用11 ml 100%甲醇重新配制。回收瓶子，摇晃并静置15分钟。在-20°C下储存。浓缩洗涤液：将1份浓缩洗涤液加入9份去离子水中，制成洗涤液。储存于4°C。

溶解溶液：使用前置于室温下。可以在RT或与其他组件一起存储。阿霉素（20mM）：使用前进行RT。在-20°C下储存。

测定方案：

1、细胞培养：将粘附细胞培养至约80%的融合度。将细胞进行胰蛋白酶化并在500 X g下离心。加入5 ml生长培养基以分散细胞。使用血细胞仪测定细胞密度。如有必要，将细胞浓度调整至25000–100000/ml。将200?l细胞悬浮液添加到96孔透明平底板中，以播种5000-20000个细胞/孔。让细胞沉淀过夜并粘附在培养板上。

2、处理：使用二甲基亚砜作为溶剂制备挑战化合物。保持化合物浓度足够高以使DMSO在细胞培养物中保持在0.5%以下。向井中添加化合物。准备DMSO载体对照和仅包含生长培养基的背景对照）。作为抑制剂对照，向含有细胞的孔中加入1?l 20 mM阿霉素。将平板在细胞培养条件下（37°C，加湿培养箱，5%CO2）培养72小时

3、结晶紫染色：去除培养基。用200?l洗涤溶液洗涤细胞。洗涤应尽可能轻柔。取出尽可能多的洗涤液。向每个孔中加入50?l Crystal Violet Stain甲醇溶液，在室温下等待20分钟。培养后，取出甲醇染色溶液。用200?l洗涤液洗涤4次。第4步洗涤后，尽可能多地去除洗涤液，并将盘子风干。

4、增溶：向每个孔中加入100?l增溶溶液。在RT.5下摇动平板20分钟。

5、测量：在570nm处测量外径。

6、计算：从所有读数中减去背景控件的外径。使用以下公式计算细胞毒性百分比：

AkrivisBio 致力于鉴别、开发和提供高质量的生物试剂和工具，这些试剂和工具在药物发现、诊断和基础研究等多个领域和应用中起着至关重要的作用。艾美捷科技是AkrivisBio的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。