Svar Life Science补体C4d检测试剂盒检测原理&结果计算

C4d越来越被认为是潜在的生物标志物，尤其是在抗体可能导致组织损伤的情况下，例如系统性自身免疫疾病。C4d有潜力检测出面临抗体介导疾病后果风险的患者。此外，开发新的阻断补体激活的治疗药物，使得C4d成为识别和监测可能从这些药物中受益的患者的标志物（9）。基于线性新表位检测的补体测定已被报道相较于构象表位具有优势，因为它降低了假阳性的风险并提高了特异性（10）。该补体测定基于检测在激活后C4切割位点暴露的短线性C4d新表位。

补体C4d测定是一种酶联免疫吸附测定（ELISA），用于人血浆中C4d的半定量测定。

该产品供专业人士使用。结果不得用于临床诊断或患者管理。仅限研究使用。

艾美捷Svar Life Science补体C4d检测试剂盒（#COMPLC4dRUO）内容：

一个带有微孔板（12x8）的框架，涂有抗C4d-Neo单克隆抗体，密封在带有干燥袋的箔包装中。

1.5毫升低浓度对照（LC）。准备使用。

1.5毫升高浓度对照（HC）。准备使用。

2x30毫升稀释液（Dil），红色。准备使用。

15毫升含有针对C4d的HRP标记抗体的结合物。准备使用。

15毫升底物TMB。准备使用。

15毫升终止液（0.5M H2SO4）。准备使用。

30毫升洗涤液，30倍浓缩。

6x1.5毫升装有含有人重组C4d的校准液，0纳克/毫升、5纳克/毫升、25纳克/毫升、100纳克/毫升、200纳克/毫升和400纳克/毫升。准备使用。 请注意： 试剂盒中的所有试剂除洗涤液外均已备好。试剂应储存在2-8°C。不得将不同批次的成分混合。在2-8°C储存时，稀释后的洗涤液在试剂盒有效期内稳定。

补体C4d检测试剂盒测定的原理：

该装置是一种比色夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）。样本在测定稀释液中稀释，将100微升稀释样本转移到微孔板孔中，并在室温下孵育60分钟。在这第一次孵育期间，样本中的C4d被预涂在微孔板表面的抗C4d-Neo单克隆抗体捕获。洗涤去除未结合的物质后，向孔中添加第二种辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体，该抗体与C4d的两种等位基因变体（A和B）结合。孵育30分钟后再次洗涤孔，然后添加底物并孵育。30分钟后停止颜色发展，并在分光光度计中测量颜色。颜色与结合到孔中的C4d量成正比。通过与校准样本的颜色发展比较，确定C4d的量。

样本收集

应使用无菌静脉穿刺技术收集血液样本，并使用标准程序获取EDTA血浆。建议最少收集5毫升全血。离心血样并将无细胞血浆转移到干净的试管中。血浆必须正确处理以防止体外补体激活。

离心后的EDTA血浆可在4°C下保存最多8小时，并应在这段时间内完成分析。对于更长时间的储存，血浆应冷冻在-70°C或更低温度。样本不应冻融超过两次。

需要但未提供的物料或设备：

带有450nm和620nm滤光片的微孔板读取器

带有一次性吸头的精密移液器。

条带洗涤器、吸水纸、试管和计时器

补体C4d检测试剂盒结果计算：

从450纳米波长减去620纳米参考波长，并计算所有样本的平均吸光度值。通过绘制校准品的吸光度与浓度的校准曲线。六个校准品的值；0纳克/毫升、5纳克/毫升、25纳克/毫升、100纳克/毫升、200纳克/毫升和400纳克/毫升。本使用说明书（图1）中的示例使用了4参数曲线拟合。用户可以选择不同的曲线拟合方式。根据校准曲线读取未知样本的浓度。

注意：计算血浆样本中C4d的浓度时，必须根据上述协议进行稀释补偿，即50倍。如果选择了不同的样本稀释度，应相应进行补偿。

图1. 校准曲线示例

请注意：上图显示了半定量标准曲线的示例，不应用于实际受试者样本的解释。