Jena Bioscience/艾美捷基于BTTAA的CuAAC细胞反应缓冲试剂盒

Jena Bioscience 铜( 铜元素 (I))-catalyzed A 齐德 A Lk连 C 化学反应( 夸亚克 描述通过三唑键形成稳定共轭-B的与端基基官能分子b的异功能分子A的反应。

由于终端烷类化合物相对而言对氮代化合物是无反应的,所以夸AAC反应的效率在很大程度上取决于铜离子等金属催化剂在+1氧化状态(CU(I))下的存在。

可以使用不同的铜源、还原剂和 Cu(I) 稳定配体，但是，对于大多数生物共轭应用，可将 Cu(II) 盐 CuSO 4作为铜源、水溶性 Cu(I) 稳定配体（例如 BTTAA）和推荐使用抗坏血酸钠作为还原剂。[1-3]

使用Picolyl-Azide试剂代替传统的Azide试剂可以进一步提高反应效率，并由于内部铜螯合部分而降低所需的最终CuSO 4浓度。[4]

CuAAC 反应的设置基于以下一般三步程序：

在适当的反应缓冲液中制备炔烃和叠氮官能化分子的混合物。

制备 CuSO 4 : Cu(I)-配体预混物，将其添加到叠氮化物-炔烃溶液中并短暂混合。

最后加入抗坏血酸钠作为还原剂开始反应。

JenaBioscience-CuAAC 细胞反应缓冲液试剂盒（基于 BTTAA）提供足够的量，使用 100 mM 磷酸钠反应缓冲液中的 2 mM CuSO 4、10 mM BTTAA 和 100 mM 抗坏血酸钠进行 50 次 CuAAC 实验 à 500 μl。

下面概述了用于标记含有代谢功能化炔烃或叠氮化物修饰生物分子的固定和透化细胞的通用方案（参见 3）。但是，不同的 CUAAC 标记实验以及关键反应参数（例如最终 CuSO4）可能需要单独优化4浓度，CuSO 4 :BTTAA比值，检测试剂浓度。

洪等人。[2]和普雷索尔斯基等人。[1]提供了有关 CuSO 4浓度、CuSO 4 ：配体比率和反应缓冲液类型影响的有用背景信息，如果需要优化，可以将其用作起点。

[1] Presolski et al. (2011) Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Click Chemistry for Bioconjugation. Current Protocols in Chemical Biology 3:153.

[2] Hong et al. (2011) Analysis and Optimization of Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition for Bioconjugation. Angew. Chem. Int. Ed. 48:9879.

[3] Besanceney-Webler et al. (2011) Increasing the Efficiacy of Bioorthogonal Click Reactions for Bioconjugation: A Comparative Study. Angew. Chem. Int. Ed. 50:8051.

[4] Uttamapinant et al. (2012) Fast, Cell-Compatible Click Chemistry with Copper-Chelating Azides for Biomolecular Labeling. Angew. Chem. Int. Ed. 51:5852.

艾美捷Jena Bioscience CuAAC细胞反应缓冲试剂盒（CLK-073）参数：

供一般实验室使用。

航运: 在常温下装运

储存条件: 在4°C储存

短期暴露(累计1周)到环境温度可能.

库亚克细胞反应缓冲盒(BTTAA基)适合于与含有代谢功能化基或氮代修饰生物分子的细胞进行铜(CU(I))催化的偶氮碱点击化学反应。

一个工具包提供足够的金额 使用2mm库索进行50次夸亚克实验 4 (铜源),10mmBttaa(铜(I)-稳定配体)和100mmNa-抗坏血酸酯(还原剂) 在100mm磷酸盐反应缓冲区。

Jena Bioscience-CuAAC细胞反应缓冲试剂盒内容:

铜来源:

2x10毫克库索 4 (M = 159.6 g/mol), #CLK-MI004)

铜(一)稳定配体:

5 x 25 mg BTTAA (M= 430.5 g/mol, #CLK-067)

还原剂:

4 x 200 mg Na-Ascorbate (M = 198.1 g/mol, #CLK-MI005)

反应缓冲区:

2x30毫升无菌100mm磷酸盐缓冲液,PH7

10毫升无菌DDH 2 O

所需但未提供的材料:

炔或叠氮化物功能化的底物，例如含有代谢功能化的炔或叠氮化物修饰的生物分子的固定和透化细胞。

(吡啶基)-叠氮化物或炔烃检测试剂和适当的溶剂（例如DMSO）

用于标记固定和透化的细胞：

洗涤溶液，例如含有 3% BSA 的 PBS

固定溶液，例如含有 3.7% 甲醛的 PBS

透化溶液，例如含有 0.5% Triton X-100 的 PBS

用于成像的封固剂

其他标记试剂，例如核染色剂或抗体

JenaBioscience的主要产品包括核苷/核酸制品系列（包括合成的类似物）、重组蛋白及蛋白表达系统、点击化学产品系列、在结构学研究方面全面提供晶体筛选试剂盒、优化试剂、工具和各类耗材等。此外，还提供分子生物学和生物化学研究的定制试剂与研究服务。艾美捷科技是Jena Bioscience的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。