HiSenseTM cDNA Synthesis Master Mix是一种在一体式格式,更方便快捷第一链cDNA的合成。
主混合物含有M-MLV(莫罗尼小鼠白血病病毒)逆转录酶(RTase)、核糖核酸酶抑制剂,dNTP和Oligo(dT)s。
寡聚体(dT)是能够与mRNA的3'-Poly(A)尾部退火的寡核苷酸。寡聚体(dT)的用途限于具有3'-Poly(A)尾部的mRNA或总RNA模板。
一般说明:
纯化的poly(A)+ mRNA和总RNA都可用于第一链cDNA合成,但poly(A)+ mRNA可能会产生更高的产量和更纯的最终产品。
RNA样本必须无基因组DNA污染。
要去除与cDNA互补的RNA,加入1 ?l (2 U)的大肠杆菌RNase H,并在37°C下孵化20分钟。
第一链cDNA合成完成后,cDNA产品可以直接作为标准PCR/qPCR中的模板使用。
艾美捷CellSafe HiSense cDNA合成主混合物#CDS-100, CDS-200, CDS-400, CDSM-200, CDSM-400, LCDS-96, LCDS-480:
CellSafe-HiSense cDNA合成主混合物特点:
包含MMLV逆转录酶(RTase)、核糖核酸酶抑制剂、dNTPs以及优化比例的寡聚体(dT)和随机引物
能在不到20分钟内快速且准确地合成cDNA
易于使用的主混合类型
cDNA合成反应体积:10?l
协议:
1)解冻RNA模板和一体化5X cDNA主混合物在冰上。轻轻但彻底地混合溶液。
2)在冰上的PCR管中制备以下反应混合物
3)将成分充分混合,并通过短暂离心收集。在以下反应条件下培养混合物。
4)新合成的第一链cDNA已准备好用于直接下游应用程序,或用于长期存储温度为-20°C。
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