CA19-9（Cancer antigen 19-9）ELISA Kit计算结果&标准曲线示例

Calbiotech-CA19-9 ELISA试剂盒用于癌症抗原的定量测定人血清或血浆中CA19-9浓度。

艾美捷Calbiotech-CA19-9（Cancer antigen 19-9）ELISA Kit：

目录编号  CA238T

产品类型 ELISA

数量  96次测试（12x8易碎条状井）

标准范围 25-600 U/mL

样本体积 25 微升/孔

物种   人类

储存和稳定性   将试剂盒存放在2 - 8°C的环境中。确保微孔板密封在装有干燥剂的干燥袋中。试剂在试剂盒有效期内保持稳定。不要将试剂暴露在热源、阳光或强光下。

CA19-9（Cancer antigen 19-9）ELISA Kit检测原理：

CA19-9elisa试验是一种改良的固相序贯夹心ELISA。将样品和生物素化的单克隆抗体加入涂有链霉抗生物素蛋白的孔中。患者样本中的CA19-9与生物素化捕获抗体结合。生物素化的抗体同时与链霉抗生物素蛋白包被的平板结合。洗涤步骤后，加入抗CA19-9-HRP酶偶联物，在捕获的CA19-9周围形成sa三明治。未结合的抗体被洗掉。加入TMB底物导致蓝色的发展。CA19-9的浓度与显色强度成正比。生成颜色强度与CA19-9浓度相关的标准曲线。

检测程序：

将所有样本和试剂盒试剂放置至室温（20-25°C）并轻轻混合。

1. 在架子上固定所需数量的包被孔。

2. 向相应的孔中分配25 ?l的CA19-9标准品、样本和对照品。

3. 向每个孔中分配100 ?l的抗CA 19-9-生物素试剂（蓝色溶液）。

4. 在500-600 rpm下彻底混合30秒钟。完全混合非常重要。

5. 在室温下孵育60分钟。

6. 清除所有孔中的液体。用350 ?L的1X洗涤缓冲液冲洗每个孔三次。每次冲洗后，将倒置的板子用力拍打在吸收性纸巾或纸巾上以去除残留的液滴。

7. 向每个孔中分配100 ?l的抗CA19-9-HRP酶结合物（红色溶液）。

8. 在室温下孵育60分钟。

9. 按照步骤6描述的方法移除内容物并冲洗板子3次。

10. 向每个孔中分配100 ?l的TMB溶液。

11. 在室温下孵育15分钟，不要摇动。

12. 通过向每个孔中添加50 ?l的终止溶液来停止反应。

13. 在15分钟内使用微孔板吸收光度读数器（使用630nm的参考波长）读取450nm处的吸光度。

计算和结果：

1. 计算每组参考标准、对照和样本的平均吸光度值（A450）。

2. 通过在图表纸上绘制每个参考标准的平均吸光度与其浓度（以U/ml为单位）的图表，构建标准曲线，使用最佳拟合二次曲线在线性图表纸上绘制，吸光度在垂直（y）轴上，浓度在水平（x）轴上。

3. 使用每个样本的平均吸光度值，从标准曲线上确定相应的CA19-9浓度（以U/ml为单位）。

标准曲线示例：

典型的标准运行结果，以450nm处的光密度读数在Y轴上显示，对应于X轴上显示的CA19-9浓度。此标准曲线仅供示例，不应用于计算未知数。每个用户应在每次实验中获取自己的数据和标准曲线。

CA19-9（Cancer antigen 19-9）ELISA Kit文献参考：

Glenn, J., Steinberg, W.M., Kurtzman, S.H., et at.  Evaluation of the utility of a radioimmunoassay for serum CA 19-9 level in patients before and after treatment of carcinoma of the pancreas.  J. Clin. Oncol. 1988; 6:462-8.

Hayakawa, T., Kondo, T., Shibata, T. et al.  Sensitive serum markers for detecting pancreatic cancer.  Cancer 1988; 61:1827-31.

Koprowski, H., Herly, M., Steplewski, Z., et al.  Specific antigen in serum of patients with colon carcinoma. Science 1981; 212:53-5

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