细胞周期直接负责细胞增殖,是各种疗法的主要靶标。因此,细胞周期分析是研究细胞如何增殖以及其调控下的治疗机制的重要工具。经典的细胞周期检测需要先将细胞用乙醇固定,用RNase处理,最后用DAPI或碘化丙啶染色并进行分析。根据使用的细胞系和实验者的需求,这些额外的步骤可能需要从几个小时到整整一天的时间。然而,细胞周期检测试剂盒(红色)(产品编号C3851)使用一种特殊的表面活性剂来渗透细胞膜,仅足以让一种DNA特异性荧光染料(7-AAD,激发波长Z大值=549nm,发射波长Z大值=648nm)进入,而不会让DNA离开细胞。通过这种方式,可以在不进行预固定的情况下进行细胞周期分析。只需收集你感兴趣的细胞,与试剂盒中包含的缓冲液/染料一起孵化Z少15分钟,然后进行测量。
细胞周期测定试剂盒(红色)#C3851组成:
7-AAD for 100 assays
Cell staining buffer for 100 assays
艾美捷东京化成(TCI)细胞周期测定试剂盒(红色)应用:
观察HeLa细胞的细胞周期
将试剂盒中包含的7-AAD溶解在100微升的DMSO中(未包含)。
将步骤1中的1微升7-AAD溶液与包含的200微升细胞染色缓冲液混合。
用胰蛋白酶处理HeLa细胞,并用PBS洗涤一次。
在试管中收集5.0x10^4个细胞。离心后吸取上清液,加入步骤2中的溶液,并孵化15分钟。
在流式细胞仪上进行细胞周期分析(?)。
(? 激光波长=488纳米,滤光片波长/带宽=700纳米/54纳米)
图使用所示方法对来自相同群体的HeLa细胞进行染色,并在流式细胞仪上进行分析。
(a)细胞用C3851染色。(b)使用传统的乙醇固定和PI/RNase方法对细胞进行染色。
这两种方法都能够清晰地分辨G0/G1、S和G2/M峰。
东京化成(TCI)细胞周期测定试剂盒(红色)文献参考:
New use for an old reagent: Cell cycle analysis of DNA content using flow cytometry in formamide treated cells
M. Carbonari, Cytom. A 2016, 89, 498.
作为TCI(东京化成)在中国的区域特约合作伙伴,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的TCI的产品及服务。
微信扫码在线客服