快速内切酶EcoRV，优良的活性，快速内切

快速内切酶EcoRV,一种酶切缓冲液,简化酶切反应,良好的酶活冗余度,轻松处理底物过量或困难模板的酶切,酶切产物可直接点胶电泳。组分：FlyCut? EcoRV，10× CutOne? Buffer，10× CutOne? Color Buffer，保存建议-20℃

艾美捷快速内切酶EcoRV：

Cat #: C-BSM537

Size: 200 rxns

Storage: -20°C

用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合适载体? EcoRV。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。FlyCut? 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

在推荐的反应条件下，这种酶将在5”15分钟内消化单位底物。酶的合适反应温度为37”C。当底物DNA被羧甲基化时，用这种限制性酶的切割可能会被阻断或受损通过80cf或20分钟的孵育灭活at。孵育3小时不显示星形活性，但较长的孵育可能导致星形活性。

使用方法：

1.快速DNA消化方案

①将以下反应组分按所示顺序在冰上混合：

a.对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化，则10×CutOne的量? 缓冲液应减少到2μl，以减少未纯化的PCR产物中剩余的金属离子。我们建议在消化用于克隆之前纯化PCR产物，因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。

②轻轻混合并向下旋转；

③ 在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组

DNA）；

④ 可选：在80°C下加热20分钟使酶失活；

⑤ l如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液，则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。

2.DNA的双重和多重消化

① 每种酶使用1μl，并适当扩大反应条件；

② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；

③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。

3.扩大质粒DNA消化反应

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