快速内切酶EcoRI：高端快速限制性内切酶

快速内切酶EcoRI是一系列高端快速限制性内切酶之一，可实现在 5–15 分钟内快速完成质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。在通用的 CutOne? 或 CutOne? Color Buffer 中都具有优良的活性。

艾美捷快速内切酶EcoRI：

Cat #: C-BSM536

Size: 600 rxns

Storage: -20°C

用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合适载体? EcoRI。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。FlyCut? 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

在推荐的反应条件下，该酶将在5“15分钟内消化单位底物。酶的合适反应温度为37”C。当底物DNA被ECOBI甲基化时，该限制性酶的切割可能会被阻断或受损。当底物脱氧核糖核酸被ECOBI甲化酶甲基化时该酶的切割也可能被阻断或损坏。该酶可以加热在80°C下孵育20分钟灭活。孵育3小时不会显示星形活性，但孵育时间较长可能会导致星形活性

快速内切酶EcoRI使用方法：

1.快速DNA消化方案

①将以下反应组分按所示顺序在冰上混合：

a对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化，则10×CutOne的量? 缓冲液应减少到2μl，以减少未纯化的PCR产物中剩余的金属离子。我们建议在消化用于克隆之前纯化PCR产物，因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。

②轻轻混合并向下旋转；

③ 在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组DNA）；

④ 可选：80°C加热20分钟灭活酶；⑤l如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液，则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。

2.DNA的双重和多重消化

① 使用每种酶1μl，并适当扩大反应条件；

② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；

③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。

3.扩大质粒DNA消化反应

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