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快速内切酶EagI,快速精确完成DNA切割

发布者:艾美捷科技    发布时间:2023-09-12     
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快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。

 

艾美捷快速内切酶EagI

Cat #: C-BSM535

Size: 25 rxns

Storage: -20°C

 

在推荐的反应条件下,快速内切酶EagI可在5~15分钟内消化单位底物。酶的极适反应温度为37°C。

当底物DNA被CpG甲基化酶甲基化时,这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。

该酶可以在80°C下孵育20分钟进行热灭活。孵育3小时不会显示星形活性,但孵育时间较长可能会导致星形活性。

 

使用方法:

1。快速DNA消化方案

①将下列反应组分按所示顺序在冰上混合:

快速内切酶EagI

a. 对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化,则应将10倍CutOne“”缓冲液的量减少到2μl,以减少未纯化PCR产物中的剩余金属离子。如果用于克隆,我们建议在消化前纯化PCR产物,因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。②轻轻搅拌并向下旋转;③在37°C下培养15分钟(质粒DNA)或15~30分钟(PCR产物)或30~60分钟(基因组DNA);

④ 可选:在80℃下加热20分钟使酶失活;

⑤ 如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液,则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。

2.DNA的双重和多重消化

① 使用每种酶1μl,并适当扩大反应条件;

② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10;③如果酶需要不同的反应温度,从需要较低温度的酶开始,然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。

3.扩大质粒DNA消化反应


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