快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。
艾美捷快速内切酶EagI:
Cat #: C-BSM535
Size: 25 rxns
Storage: -20°C
在推荐的反应条件下,快速内切酶EagI可在5~15分钟内消化单位底物。酶的极适反应温度为37°C。
当底物DNA被CpG甲基化酶甲基化时,这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。
该酶可以在80°C下孵育20分钟进行热灭活。孵育3小时不会显示星形活性,但孵育时间较长可能会导致星形活性。
使用方法:
1。快速DNA消化方案
①将下列反应组分按所示顺序在冰上混合:
a. 对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化,则应将10倍CutOne“”缓冲液的量减少到2μl,以减少未纯化PCR产物中的剩余金属离子。如果用于克隆,我们建议在消化前纯化PCR产物,因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。②轻轻搅拌并向下旋转;③在37°C下培养15分钟(质粒DNA)或15~30分钟(PCR产物)或30~60分钟(基因组DNA);
④ 可选:在80℃下加热20分钟使酶失活;
⑤ 如果在反应中使用CutOne“”颜色缓冲液,则将反应混合物的等分试样直接加载在凝胶上。
2.DNA的双重和多重消化
① 使用每种酶1μl,并适当扩大反应条件;
② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10;③如果酶需要不同的反应温度,从需要较低温度的酶开始,然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
3.扩大质粒DNA消化反应
Biogradetech全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商:Biogradetech成立于2015年,总部位于美国加利福尼亚州,早期以产品技术研发服务起家,逐步发展了广泛的产品线,并将其商业化销售,包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。
微信扫码在线客服