快速内切酶DpnII/C-BSM533，快速酶切

FlyCut? 快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有 FlyCut? 快速内切酶在通用的 CutOne? 或 CutOne? Color Buffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外，百时美去磷酸化、连接试剂在 CutOne? Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反应，提升“酶切 - 修饰 - 连接”的体验。CutOne? Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne? Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

艾美捷快速内切酶DpnII：

Cat #: C-BSM533

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

快速内切酶DpnII组分：

推荐反应条件

1xCutOne“”缓冲区；37°C培养；有关反应设置，请参阅“快速DNA消化方案”。

热灭活

在80°C下培养20分钟。

质量控制

功能测试

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“缓冲液中，在37℃下孵育15分钟，反应20μl，琼脂糖凝胶电泳测定完全消化。

长时间培养/星形活性测定

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“”缓冲液中，在37°C下孵育3小时，进行20μl反应，通过琼脂糖凝胶电泳测定，产生无可检测核酸酶降解的DNA模式。较长的孵化时间可能导致恒星活动。

结扎和清算

在37℃下用FlyCut“”Dpnll消化10倍后，>95%的DNA片段可以与22°C的T4 DNA配体连接。在这些连接的片段中，通过琼脂糖凝胶电泳测定，>95%可以用FlyCut“Dpnll重新切割。

非特异性核酸内切酶活性

在含有1μg超螺旋质粒和1μl FlyCut“”Dpnll的CutOne“”缓冲液中进行20μl反应，在37°C下孵育4小时，通过琼脂糖凝胶电泳测定，转化为刻痕或线性形式的转化率<10%。

在推荐的反应条件下，该酶可在5~15分钟内消化单位底物。酶的适反应温度为37°C。

当底物DNA被DAM甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。

当底物DNA被EcoBI甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。

该酶在80°C下保温20分钟即可热灭活，保温3小时不显示星形活性，但保温时间较长可能会产生星形活性。

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