高品质肽N-糖苷酶 F（His标签）介绍

背景：

PNGase F（肽 N- 糖苷酶 F）来源于 Elizabethkingia miricola，是一种高效的酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F 的切割位点为糖蛋白内侧 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。

艾美捷肽N-糖苷酶 F（His标签）：

Cat #: C-BSM3303

Size: 15000 U / 75000 U

Storage: -20°C

肽N-糖苷酶 F（His标签）组分：

酶活性定义：

一个单位（U）的酶活性是指在10μl反应系统中，在37°C下1小时，从10μg变性RNase B中去除95%以上的碳水化合物所需的酶量。

灭活条件：

在75°C下培养10分钟。

质量控制

蛋白质纯度检测：

产品经SDS-PAGE检测，纯度≥95%。糖苷酶和蛋白酶活性检测：

没有可检测的内切糖苷酶F1、F2或F3活性；没有可检测的蛋白酶活性。

使用说明：

1.在变性条件下的脱糖基化：

① 将1-20μg糖蛋白、1μl 10×变性缓冲液和ddH20（如有必要）混合至总体积为10μl。

注：10倍变性缓冲液在低温下储存时可能会有白色沉淀。使用前在37°C下培养即可溶解。

② 在100°C下孵育10分钟，使糖蛋白变性，然后在冰上冷却并离心10秒。

③加入2μl 10×PNGase F缓冲液，2μl 10%NP-40，并补充ddH20，使总反应体积为20μl。④加入1-2μl PNGase F，轻轻搅拌，在37℃下孵育1-3小时。

2.在非变性条件下的脱糖基化：

① 将1-20μg糖蛋白、2μl 10×PNGase F缓冲液和ddH20（如有必要）混合至总体积为20μl。

② 加入2-5μl PNGase F，轻轻混合。

③ 在37°C下培养4-24小时。

PNGase F的去除：

该产物含有His标签，反应后，PNGase F可以通过亲和层析从靶糖蛋白中使用不同的标签去除。

本试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

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