快速消化丨内切酶EcoRI, 无动物源性

EcoRI（“I”是“1”的意思）是一种限制性核酸内切酶，来自某些特定品系的大肠杆菌（E. coli，也是其名称由来），是此种细菌体内参与限制修饰系统的酶。在分子生物学或其他分子层次的生物学研究上，EcoRI限制酶能专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开切割后的小片段端点为5'端突出的黏状末端（sticky end）。

经过基因工程改造的EcoRI，ADCF，能够在5~15分钟内消化DNA。它可用于鉴定质粒DNA、PCR产物和基因组。EcoRI，ADCF具有以下特点：在5到15分钟内快速消化，极好的酶活性冗余，易于处理底物过量或具有挑战性的模板消化。这种酶不含动物来源的成分

艾美捷内切酶EcoRI, 无动物源性：

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

内切酶EcoRI, 无动物源性使用方法：

1.快速DNA消化方案

① 按照指示的顺序在冰上混合以下反应组分：

a.DNA底物不应含有苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则会影响EcoRI、ADCF的酶活性；甲基化DNA会抑制某些限制性内切酶的消化

② 轻轻混合（不要涡流）并向下旋转；

③ 在37°C下培养15分钟-60分钟，一般建议5～10 U酶/ug DNA，10～20 U酶/ugDNA，温浴1小时，如果需要过夜酶消化，请将酶量调整为10；④通过在80°C下加热20分钟使酶失活，或通过基于柱的苯酚/氯仿纯化终止反应。

⑤ 添加到反应中的酶的体积不应超过总体积的10%，以避免过量的甘油，这可能导致星形活性。

⑥ 限制性内切酶储存缓冲液中的添加剂（如甘油和盐）和底物中的污染物（如盐、EDTA或乙醇等）是相似的。反应体积越小，对酶消化反应的抑制作用越强。

⑦ 对于小规模反应，推荐的反应组分如下。

DNA     0.1 μg    0.5 μg

EcoRI, ADCF    1 U       5 U

10× EcoRI Buffer 1 μl 2.5 μl

Total      10 μlb     25 μl

b.为了避免蒸发，10μl反应缓冲液的孵育时间不应超过1小时

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