Sephadex G25，葡聚糖凝胶G-25的工作原理

Sepdex G25是一种凝胶过滤介质, 利用凝胶的孔径大小,实现不同分子量的物质的分离和纯化。以葡聚糖为基质的凝胶过滤层析介质，其工作原理主要是利用具有多孔网状结构的葡聚糖凝胶的分子筛作用，根据被分离样品中各组分相对分子质量大小的差异进行分离。

艾美捷Sephadex G25，葡聚糖凝胶G-25：

目录号：C-BETB002

尺寸：

1.树脂：10mL、50mL、100mL、250mL、500mL、1L；

2.预包装柱：5mL柱

储存：20%乙醇或0.01M NaOH，4-30°C

Sephadex G25，葡聚糖凝胶G-25应用实例：

色谱柱：XK16/30脱盐柱，柱高25cm（Sephadex G25M）。

平衡缓冲液：20mM PB+150mM NaCl，pH 7.0，通过0.45μm过滤器过滤。

流速：2 mL/min。

柱平衡：将色谱柱连接到纯化仪器上，用2-3柱体积（CV）的平衡缓冲液洗涤脱盐柱。

样品装载：添加1 mL样品，为了极大限度地延长色谱柱的使用寿命，样品应在装载前进行澄清，例如以10000 g离心10分钟或通过0.45μm过滤器过滤。洗脱：使用不超过建议zui大流速的流速，用平衡缓冲液洗涤脱盐柱至少2 CV。

柱填料

1.凝胶悬浮液的制备

计算所需膨胀介质的量（每1L柱床体积约1.15 kg沉淀凝胶）。例如，对于床高为10cm的16/20柱，膨胀介质的所需量为

πx（1.6/2）?×10×1.15=23.11g。在干净的烧杯中称取23.11g介质，并加入一定量（例如，12mL）的包装溶液。搅拌形成均匀的凝胶悬浮液。

2.柱填料

2.1检查色谱柱，确保所有成分完好无损、清洁。安装底部玻璃料，拧紧O型环，并将立柱垂直固定在铁支架上。使用水准仪检查并调整立柱使其水平。

2.2向色谱柱中加入适量的填料溶液以除去空气。拧上底部塞子，在柱中留下1-2cm的填充溶液。

2.3使用玻璃棒沿柱内壁引导凝胶悬浮液，并连续倾倒，以极大限度地减少气泡的产生。让介质自然沉淀，直到体积不再变化，此时，介质和溶液将形成不同的层，上层完全透明。

2.4将顶部玻璃料连接到低压色谱系统，并以一定的流速启动泵，以清除管道中的任何残留空气。暂停系统，将顶部玻璃料安装到柱上，玻璃料的底端高于凝胶表面约1厘米。拧紧O形环并以300-500 cm/h的流速泵送色谱柱，直到床体积不再变化。继续包装5-10分钟，并用记号笔标记凝胶表面的位置。

2.5暂停系统，拧上底部插头，断开立柱与泵的连接，向下旋转调节杆，使其停止在标记位置下方0-0.5 cm处。拧上顶部塞子以完成柱填料。

3.清洁和再生

就地清洁是为了去除变性蛋白质、脂蛋白或脂质。常用的清洗溶液包括0.2 M NaOH或非离子洗涤剂，柱应使用2-3 CV清洗。

4.储存条件

室温下储存在20%乙醇或0.01M氢氧化钠中。

Biogradetech全球生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。