牛IgA ELISA试剂盒/Bovine IgA ELISA Kit检测原理

牛 IgA ELISA 试剂盒/Bovine IgA ELISA Kit是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量牛生物样品中的IgA。如果ELISA在预期用途之外使用，则用户可能需要针对所述用途进行优化。

在该测定中，样品中存在的IgA与已吸附在聚苯乙烯微量滴定池表面的抗IgA抗体反应。在通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）缀合的抗IgA抗体。这些酶标记的抗体与先前结合的IgA形成复合物。在另一个洗涤步骤之后，通过添加显色底物3，3’，5，5’-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附结合的酶。结合酶的量与所测试样品中IgA的浓度直接相关；因此，在450nm处的吸光度是测试样品中IgA浓度的测量值。试验样品中IgA的量可以根据标准曲线进行插值，并根据样品稀释度进行校正。

艾美捷Bovine lgA ELISA试剂盒（E-10A）：

抗体类型 ELISA（酶联免疫吸附试验）

反应性 牛/奶牛

宿主 兔子

特异性/目标 IgA（免疫球蛋白A）

大小 1.0

检测范围 12.5 纳克/毫升 400 纳克/毫升

灵敏度 7.009 纳克/毫升

检测时间 90 分钟

样本类型 牛奶、血浆、血清

储存条件 2-8摄氏度

量化样品中的总牛IgA

Bovine lgA ELISA试剂盒产品组分：

抗体包被微孔板

酶联检测抗体

校准液

稀释液浓缩液

洗涤液浓缩液

显色底物溶液（3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)）

终止液

测定程序：

1. 所有样本和标准品都应进行双份测定。

2. 应尽快将标准品和测试样本（s）装入ELISA孔中，以避免吸光度(OD)读数的偏移。使用多通道移液管可以减少这种情况的发生。将以下标准品和样本各取100 μL（双份）吸入预指定的孔中：

标准0（0.0 ng/mL）双份

标准1（6.25 ng/mL）双份

标准2（12.50 ng/mL）双份

标准3（25 ng/mL）双份

标准4（50 ng/mL）双份

标准5（100 ng/mL）双份

标准6（200 ng/mL）双份

样本（双份）注入预指定的孔中。

3. 将微孔板在室温下孵育六十（60 ± 2）分钟。孵育期间要保持板盖盖好并保持水平。

4. 孵育后，吸去孔中的内容物。

5. 用适当稀释的洗涤液完全填满每个孔，然后吸去。重复三次，总共进行四次洗涤。如果手动洗涤：用洗涤缓冲液完全填满孔，然后将板倒置，将内容物倒入或摇晃到废液容器中。然后在吸水纸上用力敲击孔以去除残留的缓冲液。重复三次，总共进行四次洗涤。

6. 将100 μL适当稀释的酶-抗体结合物吸入每个孔中。在室温下孵育二十（20 ± 2）分钟。孵育期间要保持板盖盖好，避光并保持水平。

7. 如步骤5/6所述洗涤并吸干孔中的内容物。

8. 将100 μL的TMB底物溶液吸入每个孔中。

9. 在避光条件下，在室温下精确孵育十分钟（10）。

10. 十分钟后，向每个孔中加入100 μL的终止液。

11. 在30分钟内测定每个孔中内容物的吸光度（450 nm）。根据制造商的规格校准板式读取器。

结果计算：

1. 从每个样本的测试值中减去平均背景值（标准零的吸光度平均读数）。

2. 计算每个标准品的重复读数的平均值，并使用这些结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据来构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合将不那么精确。

3. 从标准曲线中插值测试样本值。校正血清稀释因子，以得出原始样本中的IgA浓度。

仅用于研究。非诊断用途。仅限体外使用。