Biomatik基于细胞的Cell-Based ELISA检测试剂盒

基于细胞的ELISA（cell-based ELISA）是一种新的定性蛋白检测技术，细胞直接在微孔板里培养，待检测时，不需裂解细胞便可直接测量微孔板里的蛋白变化，有利于检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤，样本的损失也能降到最低，比起其他普通的ELISA测定方法，Cell-Based ELISA检测技术能更快速、更方便地一次检测大量的细胞内蛋白。

Cell-Based ELISA优势：

①无需裂解细胞，只需将细胞及蛋白质原位固定

②降低蛋白质发生降解的可能性，目标蛋白损失最少；

③可测定粘附细胞还有非粘附细胞；

④整个操作在96孔板中进行，容易实现高通量样本的检测；

⑥对于磷酸化蛋白研究，可同时检测磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白水平，实现磷酸化蛋白水平的准确评估，结果比WB更可靠

Cell-Based ELISA检测原理（如下图）：将细胞种到96孔板上，经刺激或者抑制处理后，对细胞进行固定透化（方便抗体进入细胞内）， 接着分别加入一抗和二抗孵育、显色，最后测量信号。

Biomatik可提供用于检测磷酸化以及非磷酸化靶标的基于细胞ELISA（Cell-Based ELISA）的检测试剂盒。

基于非磷酸化靶标细胞的ELISA试剂盒方案

1) 细胞单层在96孔微量滴定板中培养。然后可以用兴奋剂、抑制剂等处理每个孔。然后固定和封闭细胞。

2) 加入抗原特异性一抗，与细胞表面的靶抗原结合。

3) 洗涤孔并加入与一抗结合的HRP标记的二抗。

4) 洗涤孔并加入含有TMB的溶液。TMB与HRP 发生反应，从无色变为蓝色。然后加入酸终止溶液，反应停止，蓝色变为黄色。

基于磷酸化特异性细胞的 ELISA 试剂盒方案

1) 细胞单层在96孔微量滴定板中培养。然后可以用兴奋剂、抑制剂等处理每个孔以诱导磷酸化靶标的表达，然后将细胞固定并封闭。

2) 加入磷酸化特异性或泛特异性一抗，与细胞表面的靶抗原结合。

3) 洗涤孔并加入与一抗结合的HRP标记的二抗。

4) 洗涤孔并加入含有TMB的溶液。TMB与HRP发生反应，从无色变为蓝色。然后加入酸终止溶液，反应停止，蓝色变为黄色。

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