GloMelt热转移蛋白稳定性试剂盒：快速、经济实用

GloMelt?染料在结合变性蛋白质的疏水区域后会发生荧光增强。因此，该染料可用于检测蛋白质的展开或通过进行热稳定性测定（也称为蛋白质热稳定性移动试验、差示扫描荧光测定或热荧光测定）来测量蛋白质的热稳定性。

艾美捷GloMelt热转移蛋白稳定性试剂盒（BTM-33021-T）：快速、廉价，可量化蛋白质变性温度的变化，因此可用于筛选影响蛋白质热稳定性的条件，如蛋白质突变、配体结合和缓冲剂配方（如pH值、盐类、洗涤剂和其他添加剂）。这些测定通常迅速（约30分钟）并在定量PCR系统上进行。热稳定性移动方法与高通量筛选兼容，并且需要的蛋白质比圆二色谱和差示扫描量热法等方法要少得多。

与其他环境敏感染料（如SYPRO? Orange和PROTEOSTAT? TS染料）相比，GloMelt?染料具有明显的优势。GloMelt?染料在SYBR? Green通道的定量PCR仪器中进行了优化，因此可以使用较低的反应体积和蛋白质浓度，产生强烈的信号。GloMelt?染料与高浓度的蛋白质稳定剂（如甘油和山梨醇）以及蛋白质不稳定剂（如DTT和咪唑）兼容。与SYPRO? Orange不同，GloMelt?染料在高洗涤剂浓度下表现出色。另一个优势是在热稳定性移动试验中可以与ROX染料一起使用，这可以通过增加qPCR仪器中重复一致性来改善结果，ROX染料是一种被动参考染料。

储存和处理：

将GloMelt?染料储存在-20°C的环境中，并避免光照。按照推荐的储存条件，GloMelt?染料在收到之日起可稳定保存2年。GloMelt?染料是一种潜在的有害化学物质，处理时请遵循一般实验室安全预防措施，并根据当地法规将其作为危险化学废物处理。GloMelt?染料以200倍浓度的水溶液和20%的二甲基亚砜(DMSO)供应。

将ROX参考染料储存在-20°C的环境中，并避免光照。按照推荐的储存条件，ROX可稳定保存2年。ROX以40 uM的浓度在10 mM Tris-HCL、0.1 mM EDTA中供应。

将山羊IgG对照蛋白储存在-20°C的环境中。解冻后，可在4°C条件下保存2年，或重新冷冻。避免多次冻融循环。山羊IgG对照蛋白以10 mg/mL的浓度在10 mM磷酸钠、0.15 M氯化钠、pH 7.2、0.05%偶氮二钠溶液中供应。

光谱特性：

GloMelt?染料吸收/发射波长：468/507 nm

图1：对环境敏感的荧光染料可用于监测蛋白质的温度依赖性展开。蛋白质的融化温度（Tm）是蛋白质热稳定性的一个指标

反应设置：

1. 准备1X GloMelt?工作溶液。将GloMelt?染料解冻并达到室温。轻轻摇晃和离心小瓶。使用您选择的缓冲液（如PBS、TE或水），新鲜制备足够的10X染料工作储备液，以供测定的样品数量。例如，为了准备足够的10X染料用于50个反应，每个反应体积为20 uL，将5 uL 200X染料加入95 uL PBS，每个管中使用2 uL 10X染料，以获得最终的1X染料浓度。

注意：我们建议在反应中使用1X染料的最终浓度，但可以测试0.5-2X的最终浓度以优化您的测定。我们还建议使用20 uL的反应体积以节约试剂，但可以使用多达100 uL的体积。

2. 在您选择的缓冲液中准备感兴趣的蛋白质。将蛋白质稀释至0.5-2.5 ug/uL的最终浓度进行测定。也可以使用高达5 ug/uL的浓度。对于含有IgG的测定，我们发现0.5-1 ug/uL的最终浓度效果良好。

注意：为了获得合适的结果，测试蛋白质的估计纯度应>80%，并且应无沉淀物。GloMelt?试剂盒包含可用于初始测定设置的IgG对照蛋白质。每次实验中不需要运行IgG对照样品。

3. 在qPCR管或qPCR板上设置反应，并使用光学密封。反应包含染料、测试蛋白质、缓冲液，还可以包含测试添加剂和ROX（如通用反应设置所示）。我们建议准备不含蛋白质的反应控制样品（NPCs），包含除了测试蛋白质以外的所有反应组分。应准备至少3个每个反应的重复样品，以测试一致性并获得统计学上显著的结果。

注意：如果您的蛋白质在室温下的稳定性未知，建议在冰上进行反应设置。如果您的蛋白质在室温下具有热稳定性，可以在室温下进行反应设置。

Biotium公司位于美国加利福尼亚的BAY AREA。该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生 物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。