Assay Genie 高精度脂肪酸氧化检测：脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒

发布者：艾美捷科技发布时间：2024-05-17

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Assay Genie脂肪酸氧化测定试剂盒是一种用于定量测量细胞和组织中脂肪酸氧化的高度敏感的比色法检测。这种独特的检测利用了高度可溶的辛酸辅酶A底物，与较长链且溶解度较低的底物（如18碳不饱和脂肪酸油酸）相比，能够更准确地测量脂肪酸氧化。

作为Assay Genie全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Assay Genie热销产品脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

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脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒	BR00001	查看

脂肪酸提供的ATP比碳水化合物（如葡萄糖）每碳单位要多。在心脏组织等高能量需求的组织中，高达50-70%的能量来自脂肪酸β-氧化，这一过程将脂肪酸转化为乙酰辅酶A，并在线粒体中同时产生FADH2和NADH。

这一严格的需氧氧化途径由四个独特步骤组成：辅酶A酰基脱氢酶催化的酰基辅酶A脱氢、烯酰辅酶A水合酶催化的水合、3-羟基酰基辅酶A脱氢酶催化的脱氢以及β-酮硫解酶催化的硫解。β-氧化系统在人类中的重要性体现在存在一组被归类为脂肪酸氧化障碍（FAODs）的遗传性疾病，这是一组异质性脂肪酸转运和氧化缺陷，作为常染色体隐性遗传疾病，具有广泛的临床表现。此外，证据表明，在胎儿发育期间调节FAO活性不仅对胎内生命重要，而且对成年后的健康和疾病也有影响。因此，测量FAO活性为了解许多疾病的病理生理和代谢基础提供了宝贵的见解。

图1：脂肪酸氧化测定：从健康的仓鼠心脏和与心力衰竭相关的TO2仓鼠模型的心脏制备组织裂解物。在测定中使用裂解物，并对脂肪酸氧化水平进行定量。

图2：脂肪酸氧化测定：辛酰基辅酶A是底物，而不是反应的产物。请看图表。

细胞/组织提取物的制备：

Step	Procedure
1.	用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤约106个细胞两次，并将PBS从细胞沉淀中完全去除。细胞颗粒应储存在-80?C。组织样品应用PBS彻底清洗以去除血细胞，这可能会导致测定结果不一致。
2.	用冰冷的dH2O稀释10x细胞裂解液，制备足够的1x细胞裂解液。向细胞沉淀中加入50–100?l冰冷的1x细胞裂解溶液。通过上下移液（轻轻但彻底）提取细胞。将裂解物在冰上静置5分钟，不时轻轻搅拌。如果裂解液粘稠，再加入1倍细胞裂解液并重复移液。将裂解物在冷冻微离心机中以Z大速度离心5分钟。回收上清液进行测定。将组织在1x细胞裂解液中匀浆，并通过离心澄清裂解物。每0.5 ml 1x细胞裂解液使用约25 mg组织进行组织匀浆。
3.	进行蛋白质测定以确定样品蛋白质浓度。用冰冷的1x细胞裂解液稀释至1-3 mg/ml，使样品蛋白质浓度正常化。将蛋白质样品始终放在冰上。冻融的粗蛋白裂解物可以表现出降低的酶活性。赖氨酸盐应储存在-80?C。注意：不要使用含有还原剂或SDS的缓冲液。

试剂解冻：

将解冻的粮农组织检测溶液和20倍粮农组织基质置于冰上。移液前轻轻搅拌溶液。尽量缩短试剂解冻的时间是很重要的。使用后立即冷冻溶液。

对照溶液和反应溶液的制备：

对照溶液的制备方法是将1份dH2O和20份FAO测定溶液混合，例如将25?l dH2O与500?l FAO测定液混合。在测定过程中，将新制备的对照溶液置于冰上。

将1份20x FAO基质和20份FAO测定溶液混合制备反应溶液，例如将25?l 20x粮农组织基质与500?l粮农组织测定溶液混合。将溶液放在冰上并立即使用。用50?l对照溶液和50?l反应溶液分两组处理每个蛋白质样品。

Assay Genie旗下涵盖了15种种属的高品质的ELISA试剂盒及多种抗体，可检测的指标种类丰富，覆盖免疫、代谢和分子等多种研究领域，是科学研究中便捷的小助手。

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