COX1抑制剂筛选检测试剂盒测定协议&示例结果

COX1（环氧合酶1），也称为前列腺素内过氧化物合酶1（PTGS），是一种过氧化物酶，通过将花生四烯酸转化为前列腺素H2参与前列腺素的形成。COX1在大多数细胞中恒定表达，并参与组织稳态。COX-1通过增加粘液和碳酸氢盐的形成，减少酸和胃蛋白酶的分泌，并保持适当的血流，促进胃粘膜的细胞保护。它参与血小板中血栓素A2（TxA2）的形成，这刺激了聚集和血管收缩。COX1和COX2在523位点不同，COX2有一个缬氨酸，而COX1有一个异亮氨酸残基，这使得开发特定抑制剂成为一个挑战。使用COX抑制剂或NSAIDs（非甾体抗炎药）是常见的用于管理疼痛和炎症的方法。传统的NSAIDs，如阿司匹林和布洛芬，可能导致消化系统的损害。使用低剂量阿司匹林可以帮助预防动脉血栓形成，发现其他能够抑制COX1的化合物可能证明在心血管疾病治疗中作为辅助药物是有益的。

COX1抑制剂筛查试剂盒旨在测量COX1（环氧化酶1）活性，用于筛查和分析应用。该检测试剂盒采用方便的96孔格式，含有足够的纯化重组COX1、Amplex?Red、花生四烯酸稀释剂、COX检测缓冲液和100%乙醇，可用于100种酶反应。

艾美捷COX1抑制剂筛选检测试剂盒：

货号：BPS-82203

测定试剂盒格式：荧光生成

物种：人类

需要但不提供的物料：

花生四烯酸（Cayman Chemical #90010.1）

可调微量移液器和无菌吸头

能够在λex535/λem590 nm下测量的荧光板读数器

储存/稳定性：

如果按照指示储存材料，这个测定试剂盒在收到日期后的6个月内将表现最佳。

应用：研究酶动力学，筛选小分子抑制剂，用于药物发现和高通量筛选应用。

运输温度：-80°C

科学类别：代谢酶

仅供研究使用

COX1抑制剂筛选检测试剂盒测定协议：

? 所有样本和对照应以双份进行。

? 测定应包括“阴性对照”、“阳性对照”和“试验抑制剂”条件。

? 建议使用时将稀释后的蛋白质保持在冰上。

? 有关蛋白质处理的详细信息，请参阅蛋白质常见问题解答（bpsbioscience.com）。

? 推荐使用Valdecoxib作为内部对照。如果不对控制抑制剂进行剂量反应曲线测定，建议以0.1倍、1倍和10倍IC50值运行控制抑制剂，IC50值如下所示。

1. 将COX测定缓冲液和Amplex? Red解冻。

2. 在冰上解冻COX1。轻轻旋转管子以回收其全部内容物。

3. 用COX测定缓冲液将COX1稀释至35 ng/?l（每个孔需要20 ?l）。

4. 将稀释后的COX1 20 ?l添加到所有孔中，除了“阴性对照”孔。

5. 向“阴性对照”孔中添加70 ?l的COX测定缓冲液。

6. 准备试验抑制剂（每个孔10 ?l）：对于滴定，准备比期望的最终浓度高10倍的连续稀释。反应的最终体积为100 ?l。

6.1. 如果试验抑制剂是水溶性的，在COX测定缓冲液中准备比期望的最终浓度高10倍的连续稀释。对于阳性和阴性对照，使用COX测定缓冲液（稀释液）。

7. 将10 ?l试验抑制剂添加到指定的“试验抑制剂”孔中。

8. 将10 ?l稀释液添加到“阳性对照”和“阴性对照”孔中。

9. 将Amplex? Red用蒸馏水稀释10倍。

10. 向所有孔中添加10 ?l稀释后的Amplex? Red。

11. 在玻璃瓶中准备花生四烯酸（未提供），12. 向所有孔中添加10 ?l 0.5 mM花生四烯酸。

13. 立即在荧光读数器中读取样品的荧光强度（激发波长 = 535 nm；发射波长 = 590 nm）。

COX1抑制剂筛选检测试剂盒示例结果：

在浓度增加的SC-560（Tocris#1550）存在下测量COX1活性

COX1抑制剂筛选检测试剂盒文献参考：

Zaragoza C., et al., 2022 Molecules 27(3):1146.

Bruno A., et al., 2023 Adv Pharmacol 97:133-165.

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