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SIN载体,抗CD 19 CAR慢病毒(CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z)方案

发布者:艾美捷科技    发布时间:2024-08-06     
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抗CD19 CAR慢病毒是复制能力不强、基于HIV的VSV-G假型慢病毒颗粒,已准备好转导大多数哺乳动物细胞,包括原代细胞和非分裂细胞。这些病毒转导与第二代CAR(嵌合抗原受体)连接的抗CD19(克隆FMC63)的ScFv部分,该部分含有CD8铰链和跨膜结构域、4-1BB和CD3ζ信号结构域。该构建体还包括抗CD19 CAR盒下游的IRES增强型绿色荧光蛋白(eGFP)序列,以促进转导细胞的分析和分选(图1)。

 

抗CD19 CAR慢病毒

图1。(A) 用于产生抗CD19 CAR慢病毒的慢病毒载体示意图。该向量是SIN向量,它包含eGFP。(B) 构建显示抗CD19 CAR成分的图。

注:该产品转导的抗CD19 CAR构建体(CD19 ScFv-CD8-4-1BB-CD3ζ)与其他可用的抗CD19CAR慢病毒(BPS Bioscience#78600、78601和78602)相同,但在关键方面有所不同。该产品含有eGFP报告/选择标记,因此可以根据eGFP表达对转导的细胞进行分类。请参阅表1。

 

艾美捷抗CD19 CAR慢病毒(CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z,eGFP)(#BPS-78775):

提供形式:50微升的抗CD19 CAR,滴度≥3×10^8 TU/ml。每批的滴度可能会有所不同;确切的数值会随每次发货提供。

配方:这些慢病毒是从HEK293T细胞生产的,经过浓缩并重新悬浮在DMEM中。

储存/稳定性:慢病毒随干冰发货。长期储存建议在-80°C下保存慢病毒,自收到之日起可保存长达12个月。避免重复冻融。每次冻融都可能导致滴度显著下降。

培养基:

T细胞培养基:TCellM?(BPS Bioscience #78753)补充了10 ng/ml的白介素-2(BPS Bioscience #90184)。

实验所需的培养基:

解冻培养基3(BPS Bioscience #60186):F-12K培养基(Kaighn对Ham's F-12培养基的改良)补充了10% FBS,1%青霉素/链霉素。

应用:作为T细胞中抗CD19 CAR评估的阳性对照。

转导优化实验。

生成抗CD19 CAR-T细胞(仅限研究使用,不用于治疗目的)。

运输温度:-80°C。

 

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