高通量两步荧光素酶检测系统：灵敏度高、稳定性好

荧光素酶被用作一种敏感的报告基因来研究广泛的生物反应。它最初是从北美洲的Photinus pyralis克隆出来的，能够催化D-荧光素在ATP和镁的存在下被氧化，发出黄光。这个反应具有高量子产率，而且荧光素酶和荧光素都具有低毒性。这些特性使得荧光素酶成为了一种常用的工具。另一方面，海肾荧光素酶不依赖ATP，能在氧气的存在下将虫荧光素转化为虫荧光酰胺，发出蓝光。两种荧光素酶相对于例如荧光蛋白都有相对较短的半衰期，这允许进行动态研究。通过在同一样本中将荧光素酶报告基因对某一刺激的响应标准化为控制报告基因，例如海肾荧光素酶报告基因，可以提高荧光素酶报告基因的准确性。

两步萤光素酶（萤火虫和雷尼拉）检测系统旨在高通量、快速定量单个哺乳动物细胞培养样本中的萤火虫和雷尼拉萤光素酶。它配备了足够的试剂，可以在96孔板中进行100次100μl的测定。

艾美捷两步荧光素酶检测系统：

货号：BPS-60683-1

同义词：荧光素，萤火虫荧光素酶，荧光素酶缓冲液，海肾荧光素酶，荧光素酶检测缓冲液

需要但不提供的物料：

与读取仪器兼容的多孔组织培养板。

在实验启动子下表达萤火虫荧光素酶的哺乳动物细胞，以及在控制启动子下表达海肾荧光素酶的细胞。

适当的细胞培养基。

实验室平台摇床。

发光计

储存/稳定性：如果按照指示储存材料，这个测定试剂盒在收到日期后的6个月内将表现最佳。

应用：在培养的哺乳动物细胞中监测萤火虫（Photinus pyralis）和海肾荧光素酶活性。

基于发光的高通量药物筛选

运输温度：-20°C

科学类别：基于细胞的测定试剂盒

仅供研究使用

两步荧光素酶检测系统具有几个相关的特点：

? 灵敏度高 – 能够高度敏感地检测荧光素酶和海肾荧光素酶活性。

? 稳定性好 – 荧光素酶信号输出稳定超过一小时，提供了孵育时间的灵活性。

? 高通量 – 其简单的均相协议最小化了操作步骤，支持高通量筛选应用。

? 兼容性 – 与含有高达10%血清和酚红的多种常见培养基兼容。

两步荧光素酶检测系统示例结果：

图1：使用TWO-Step荧光素酶（萤火虫和海肾）测定系统和另一种商业可获得的荧光素酶试剂测量的荧光素酶活性。HEK293细胞被种植在96孔板中，并转染了Notch荧光素酶报告基因、一个持续表达海肾荧光素酶的载体，以及Notch1表达载体或对照表达载体（小鼠Notch1信号通路报告试剂盒BPS Bioscience #60509）。转染后48小时，使用TWO-Step荧光素酶（萤火虫和海肾）测定系统或另一种商业可获得的选项测量发光。向细胞中添加荧光素酶试剂，并在试剂添加后15分钟测量发光。所示数据代表背景减去的发光。A. 使用BPS Bioscience或竞争试剂测量的由Notch荧光素酶产生的萤火虫衍生发光信号分析。B. 使用BPS Bioscience或竞争试剂测量的由海肾荧光素酶产生的海肾衍生发光信号分析。C. 标准化的荧光素酶活性，对应于由对照海肾荧光素酶产生的海肾衍生发光与Notch荧光素酶产生的萤火虫衍生发光的比率。

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