重组人PKMYT1(蛋白激酶,膜相关酪氨酸/苏氨酸1),全长。该结构包含一个N端GST标签。对重组蛋白进行亲和纯化。
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PKMYT 1,GST标签 | BPS-101569z | 查看 |
PKMYT 1,GST标签:
同义词:膜相关酪氨酸和苏氨酸特异性cdc2抑制蛋白激酶,Myt1激酶,MYT1
物种:人类
构建:PKMYT1 (GST-全长)
宿主物种/表达系统:Sf9
纯度:≥85%
格式:水溶液
配方:50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 10 mM谷胱甘肽,0.1 mM EDTA,0.25 mM DTT,0.1 mM PMSF,25%甘油
分子量:93 kDa
氨基酸:全长
特异性活性:10 pmol/min/?g
Genbank编号:NM_004203
UniProt编号:Q99640
标签:N端GST标签
储存/稳定性:在-80°C下至少6个月。
PKMYT 1,GST标签产品数据库:
检测条件:
激酶活性是通过使用ADP-Glo?激酶检测试剂盒(Promega;Cat# V9101)来测量的,该试剂盒可以量化产生的ADP量。ADP-Glo?试剂被添加以终止反应并耗尽剩余的ATP。然后添加激酶检测试剂,将ADP转化为ATP,并使用荧光素酶反应来测量新合成的ATP。
PKMYT1激酶活性是通过使用在50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM NaCl, 0.25 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 25%甘油中稀释的非活性CDK1来测量的,最终浓度为0.1 mg/ml。反应通过混合不同量的PKMYT1与25 ?M ATP在40 mM Tris-HCl, pH 7.4, 20 mM MgCl2, 0.1 mg/ml BSA, 250 ?M DTT和底物中启动,最终浓度为0.5 ?g/ml。
在37°C下孵育40分钟后,通过添加AMP-Glo?试剂终止反应,然后在室温下继续孵育40分钟。接着添加激酶检测试剂,并孵育另外30分钟。使用GloMax?-Multi微孔板阅读器上的发光模块协议测量发光。校正后的活性(RLU)是通过减去每个样品的空白值,然后除以(ADP的特异性活性RLU/pmol)(反应时间min)(酶量?g或mg)来计算的。空白是通过用等体积的激酶稀释缓冲液IX(1X)替换酶工作溶液,从“无激酶”样品中确定的。
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