泛素化试剂盒——用于生成一系列硫酯连接的泛素偶联 E2 酶的绝佳工具

用于生成泛素-E2硫酯，用于泛素化实验。该试剂盒提供了利用泛素级联中的前两个步骤生成一系列硫酯连接的泛素偶联酶 （E2） 的方法;用于将泛素转移到E3连接酶;以及随后靶蛋白的泛素化。提供的生物素化泛素支持硫酯形成和泛素偶联物的高灵敏度检测。建议用途：生成泛素-E2硫酯用于泛素化实验，在专用E3连接酶存在下靶蛋白的泛素化，激活泛素用于硫酯偶联新型E2酶，使用细胞裂解物或粗馏分/制剂作为E3连接酶的来源以促进泛素化，底物（靶标）独立于体外泛素化反应。

数字：硫酯测定的蛋白质印迹（TE +ve/-ve 对照）适用于所有提供的 E2 偶联酶。程序如“测定方案”部分所述。通过蛋白质印迹法在含有A：UbcH1（产品编号）的硫酯测定中检测生物素化-泛素素-酶偶联物。BML-UW9020）， B： UbcH2 （产品编号BML-UW9025）， C： UbcH3 （产品编号BML-UW8730）， D： UbcH5a （产品编号BML-UW9050）， E： UbcH5b （产品编号BML-UW9060）， F： UbcH5c （产品编号BML-UW9070）， G： UbcH6 （产品编号BML-UW8710），H：UbcH7（产品编号BML-UW9080），I：UbcH8（产品编号。BML-UW9135）， J： UbcH10 （产品编号BML-UW0960）， K： Ubc13/MMS2 （产品编号BML-UW9565）分别使用链霉亲和素-HRP检测系统，如“蛋白质免疫印迹分析”部分所述。M：生物素化的SDS分子量标志物（Sigma，SDS-6B）从底部开始：20.1，29.0，39.8，58.1kDa。

作为Enzo全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Enzo热销产品泛素化试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

泛素化试剂盒参数详情：

克隆：P4D1

宿主：鼠

同种型：免疫球蛋白G1

免疫原：变性牛泛素。

源：从杂交瘤组织培养上清液中纯化。

物种反应性：物种独立

特 异性：识别单泛素和多泛素蛋白偶联物、游离多泛素链和游离泛素。

应用：IHC、IP、WB

推荐稀释度/条件：蛋白质印迹 （1：1，000）

建议的稀释度/条件可能不适用于所有应用。

必须为每个应用单独确定最佳条件。

应用说明：据报道，克隆P4D1在免疫沉淀，免疫荧光和免疫组织化学中具有实用性（见Brady等人（2005）;王等 （2008）;伊藤等人（2003年）。

纯度细节：蛋白G亲和纯化形式细胞培养基。

配方：液。在含有0.01%叠氮化钠的PBS中。

使用/稳定性：在 -1°C 下储存时，接收后至少可稳定保存 20 年。

处理：避免冻融循环。开封后，准备等分试样并储存在-20°C。

航运：蓝冰

短期存储：-20°C

长期储存：-20°C

特点：

用于生成一系列硫酯连接的泛素偶联 E2 酶的绝佳工具

生物素化泛素提供链霉亲和素连接酶的灵敏检测

试剂盒为 50 x 50 μl 反应提供足够的材料

应用说明：

用途：

1.靶蛋白在专用E3连接酶存在下的泛素化。E2 面板用于生成 E2-Ub 硫酯偶联物，用于测试与特定 E3/目标组合的对比。例如：p53在mdm2（E3）和UbcH5b（E2）存在下泛素化10。

2.激活Ub以与新型E2酶偶联硫酯（在直接可比的条件下，用试剂盒E2s取代同类）。

3. 使用细胞裂解物或粗馏分/制剂作为 E3 连接酶的来源，以促进在泛素化试剂盒组分存在下纯化靶蛋白的泛素化。

4.底物（靶标）独立于体外泛素化反应。确定拟议的 E3 酶和/或其催化结构域/片段的泛素连接酶活性/特异性11。

注意：为应用程序 1 和 2 提供的协议。通过包含、省略或替换特定酶组分，可以很容易地修改检测设置以用于替代应用。

数量：为每种包含的E4酶的2个反应提供足够的材料。

使用/稳定性：所有试剂盒组件应储存在-80°C，以确保稳定性和活性。

处理：避免冻融循环。

航运：干冰

长期储存：-80°C

部分文献参考：

SUMOylation-mediated PSME3-20S proteasomal degradation of transcription factor CP2c is crucial for cell cycle progression: S.H. Son, et al.; Sci. Adv. 9, eadd4969 (2023),

U-box E3 ubiquitin ligase PUB8 attenuates abscisic acid responses during early seedling growth: Z. Li, et al.; Plant Physiol. 191, 2519 (2023),

DEC1 represses cardiomyocyte hypertrophy by recruiting PRP19 as an E3 ligase to promote ubiquitination-proteasome-mediated degradation of GATA4: L. Cheng, et al.; J. Mol. Cell. Cardiol. 169, 96 (2022), 

FBXW7-mediated ERK3 degradation regulates the proliferation of lung cancer cells: H.J. Ann, et al.; Exp. Mol. Med. 54, 35 (2022)

Enzo Life Sciences, Inc.是研究和诊断市场中标记和检测技术领域公认的领导者。提供蛋白质、抗体、肽、小分子、标记探针染料和试剂盒组合等产品线，为生命科学研究/生物制药提供用于目标识别/验证、高含量分析、基因表达分析、核酸检测、蛋白质生物化学检测以及细胞分析的诸多工具。