泛素激活酶E1负责泛素-蛋白质同肽键形成的第一步,并且是体外偶联反应启动的关键组分。E1通过首先用ATP对泛素的C端甘氨酸羧基进行腺苷酸化来激活泛素,然后通过形成高能硫醇酯键并释放游离AMP,将该残基连接到E1中半胱氨酸残基的巯基侧链部分。E1分子内有两个活性位点,使其能够同时容纳两个泛素分子,新的泛素形成腺苷酸中间体,因为前一个被转移到硫醇位点。然后,活化的泛素通过E2/E3偶联级联转移到靶蛋白的赖氨酸中。
图一: 通过考马斯染色确定产品纯度 SDS-PAGE
图B:用于 E2 偶联酶的硫酯测定(TE +ve/-ve 对照)的蛋白质印迹。生物素化-泛素-酶偶联物通过蛋白质印迹法检测含有:A:UbcH2(产品编号:UbcH9025)。BML-KW8)、B:UbcH9135(KW6),分别采用链霉亲和素HRP检测系统。M:生物素化的SDS分子量标志物(Sigma,SDS-20B)从底部开始:1.29,0.39,8.58,1.<>kDa。
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泛素激活酶E1(人),(重组)(His标签) | BML-UW9410-0050 | 查看 |
泛素激活酶E1(人),(重组)(His标签)详情:
分子量:118 千达
源:在大肠杆菌BL21(λDE3)表达系统中产生,含有C端His6标签。全长人泛素激活酶E1。
统一认证:P22314
配方:液。在50mM TRIS-HCl中,pH 7.5,含有1.0mM DTT。
纯度:≥90% (SDS 页面)
纯度细节:通过多步色谱纯化。
航运:干冰
长期储存:-80°C
处理:避免冻融循环。
科学背景:结果表明,在所有TE + ve对照反应中,普素硫酯连接的E2偶联物均形成预期大小。在TE –ve对照反应中缺乏这种偶联物表明它们的形成是ATP依赖性的(E1激活所必需的),因此来源于泛素级联反应。
监管状态:RUO - 仅供研究使用
部分文献参考:
Structural basis for HIV-1 antagonism of host APOBEC3G via Cullin E3 ligase: F. Ito, et al.; Sci. Adv. 9, eade3168 (2023),
Protocol to detect in vitro and in cell ubiquitylation of mitochondrial DNA polymerase gamma by mitochondrial E3 ligase MITOL: M. Hussein, et al.; STAR Protoc. 3, 101710 (2022),
Redox-sensitive E2 Rad6 controls cellular response to oxidative stress via K63-linked ubiquitination of ribosomes: V. Sim?es, et al.; Cell Rep. 39, 110860 (2022)
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