胱天蛋白酶—1（人），（重组），实验步骤简便

首先描述的半胱天冬酶，半胱天冬酶-1随后被发现与Ced-3同源，Ced-<>是秀丽隐杆线虫半胱天冬酶对细胞凋亡至关重要。

半胱天冬酶-1 （ICE） 测定（目录 #BML-SE168）：测定缓冲液：（50mM HEPES，pH 7.4，100mM 氯化钠，0.1% CHAPS，1mM EDTA，10% 甘油，10mM DTT）

半胱天冬酶-1 （BML-SE168）：

在使用前在测定缓冲液中稀释至 10 U/μl。

AC-YVAD-pNA （ALX-260-026） 比色底物：（测定缓冲液中的 400 μM 储备溶液;储存在-20°C。 使用前加热至测定温度。向5mg净肽（MW = 629）加入159μlDMSO，以制备50mM储备液。用检测缓冲液将 50mM 储备液稀释至 400 μM。

反应条件：

1）将45μl测定缓冲液加入1/2体积微量滴定板中。允许平衡以测定温度。

2）向每个适当的孔中加入5μl半胱天冬酶-1（10U / μl）。包括2个空白（5μl测定缓冲液而不是半胱天冬酶-1）。

3）要开始反应，加入50μlAc-YVAD-pNA底物（400μM在测定缓冲液中）。最终底物浓度=200μM。

4）持续监测A405nm。

5）数据分析：绘制OD与时间的关系图，并确定曲线线性部分的斜率。使用10，500M-1cm-1的硝基苯胺消光系数，并调整样品的光程（在0/5体积，100孔板的孔中，96μl~<>.<>cm）将OD / min转换为底物/分钟的速率。

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胱天蛋白酶—1（人），（重组）详情：

替代名称：白细胞介素1β转化酶，IL-1β转化酶，ICE

分子量：~20 + 10kDa

源：产于大肠杆菌。cDNA编码的残基与Genbank入库号的Asn120-His 404（C末端）相同。M87507，除了Asp381到Glu的变化外，引入以稳定酶以防止自体蛋白水解。

统一认证：P29466

配方：液。在 50mM HEPES，pH 7.4 中，含有 100mM 氯化钠、0.5% CHAPS、1mM EDTA、10% 甘油和 10mM DTT。

纯度：≥90% （SDS 页面）

纯度细节：通过多步色谱纯化。

活动：100 U/μl

具体活动：一个U=1 pmol/min，使用Ac-YVAD-pNA（200μM;产品编号。ALX-260-026）为底物，在30°C下。

应用说明：研究酶调节和动力学、切割目标底物、筛选抑制剂的有用工具。

航运：干冰

长期储存：-80°C

使用/稳定性：初次解冻后，将产品分装到单独的试管中，并在 -80°C 下重新冷冻。 避免重复冷冻/除霜循环。该酶在冰上稳定，通常需要建立实验所需的时间（30-60分钟），但长时间储存在冰上可能会失去活性。建议在测定开始前尽可能短的时间内解冻和稀释酶。剩余的、未稀释和未使用的酶应通过例如在干冰乙醇浴或液氮中快速冷冻来快速重新冷冻。该酶至少在 4 次冻融循环中保持稳定。

部分相关文献：

A small molecule inhibitor of caspase-1 inhibits NLRP3 inflammasome activation and pyroptosis to alleviate gouty inflammation: D.Y. Cao, et al.; Immunol. Lett. 244, 28 (2022), 

The colonic pathogen Entamoeba histolytica activates caspase-4/1 that cleaves the pore-forming protein gasdermin D to regulate IL-1β secretion: S. Wang, et al.; PLoS Pathog. 18, e1010415 (2022),

An Essential Role for SHARPIN in the Regulation of Caspase 1 Activity in Sepsis: M.V. Nastase, et al.; Am. J. Pathol. 186, 1206 (2016)

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