Biogradetech 胶原酶，1 型（Collagenase）在细胞分离和组织工程中的多效性应用

粗制胶原酶制剂包含两种不同胶原酶的几种同工酶、一种巯基蛋白酶、氯链蛋白酶、一种类似胰蛋白酶的酶和一种氨肽酶。这种胶原酶和蛋白酶活性的组合在分解细胞间基质方面非常有效，这是组织解离的关键部分。该复合物的一个组成部分是一种水解酶，它优先在天然胶原的螺旋区域中降解，特别是在序列Pro-Y-Gly-Pro中的Y-Gly键，其中YZ常是一种中性氨基酸。这种裂解产生的产品容易进一步被肽酶消化。粗制胶原酶被金属螯合剂如半胱氨酸、EDTA或邻苯二酚抑制，但不被DFP抑制。它也被α2-巨球蛋白，一种大型血浆糖蛋白抑制。酶活性需要Ca2+。每种胶原酶特有的酶谱已与用于研究的细胞来源的组织（或细胞的使用目的）相关联，因此通过相关性已建立了几种类型的粗制胶原酶：类型1、2、3和4。

- 类型1粗制胶原酶具有原始的胶原酶、酪蛋白酶、氯链蛋白酶和胰蛋白酶活性的平衡。

- 类型2含有较高相对水平的蛋白酶活性，特别是氯链蛋白酶。

- 类型3含有Z低水平的次级蛋白酶。

- 类型4设计为特别低的胰蛋白酶活性，以限制对膜蛋白和受体的损伤。

- 类型5含有更高的胶原酶和酪蛋白酶值。

- 类型6含有高胶原酶活性，酪蛋白酶与胶原酶的比例约为2:1。设计为相对于类型I（col G）胶原酶，富含类型II（col H）胶原酶。

- 类型7含有比类型1和2胶原酶高四倍的胶原酶和酪蛋白酶活性。

- 纯化胶原酶，代码：CLSPA，含有Z少的次级蛋白水解活性以及高胶原酶活性。

无动物源类型AFA、AFB和AFC，STZ1和STZ2胶原酶是从完全不含动物成分的培养基中培养出来的，设计用于生物加工应用，其中必须防止潜在的动物源性病原体的引入。次级蛋白酶的水平与类型1和2胶原酶相似。

- CLSAFA是原始的AFA等级，设计为具有与类型1和2胶原酶相似的胶原酶和次级蛋白酶。

- CLSAFB含有比CLSAFA更高的胶原酶和酪蛋白酶活性。

- CLSAFC具有类似于类型4胶原酶的特别低的胰蛋白酶活性。

- CLSAFD含有比CLSAFA高两到三倍的特定活性。

- 纯化胶原酶，代码CLSAFP含有Z少的次级蛋白水解活性以及高胶原酶活性。

- STZ1和STZ2，0.22μ过滤STEMxyme AOF胶原酶/中性蛋白酶（Dispase）混合物，用于原代细胞和干细胞的分离。

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胶原酶测定是Mandl的改良方法，其中胶原酶与天然胶原共同孵育五小时，然后使用Moore和Stein, JBC, 176, 367, (1948)比色法硝基羟基吲哚法确定胶原分解的程度。释放的氨基酸以胶原酶每毫克微摩尔亮氨酸表示。

胶原酶，1 型（Collagenase）用途：

粗制胶原酶广泛用于酶促原代细胞分离和组织解离程序。大多数研究者使用如类型1、2、3和4的粗制胶原酶制剂，或者色谱纯化的胶原酶；后者通常与弹性酶、透明质酸酶等次级酶结合使用。为了获得Z佳结果，必须将蛋白水解活性的精确混合物定制到要解离的组织。类型与不同组织的有效性之间的相关性一直很好，但并不完美，可能部分取决于使用参数、目标以及批次间变化。

文献参考：

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Ala-aho, R. and Kahari, V.

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Amsterdam, A. and Jamieson, J.

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An Editorial.

Collagenase and Rheumatoid Arthritis , N Engl J Med 279 , 942 , 1968

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