Biogradetech Sphingosine 1-phosphate (S1P) 琼脂糖珠：探索S1P生物学功能的有力工具

脂质包被珠被设计用于蛋白质下拉实验。用于检测纯化蛋白质、细胞裂解物中蛋白质的脂质结合，或放射性标记的体外翻译产物的结合。

S1P珠由琼脂糖组成，每毫升珠含有10纳摩尔的结合鞘氨醇1-磷酸（S1P），足以进行几次蛋白质结合实验。每1mL S1P珠粒包括少量对照珠粒。更多数量的控制珠也可供购买。

作为Biogradetech独家代理，艾美捷科技强烈推荐Biogradetech热销产品 Sphingosine 1-phosphate (S1P) 琼脂糖珠。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Sphingosine 1-phosphate (S1P) 是一种重要的生物活性鞘脂，参与多种细胞过程。

S1P 琼脂糖珠的原理与特点

S1P 琼脂糖珠利用琼脂糖珠的高吸附性和特异性，通过特定的化学或生物学方法将S1P固定于珠上。这种设计允许研究人员通过简单的操作步骤，从复杂的生物样品中捕获和富集S1P。

S1P 琼脂糖珠的应用

S1P 琼脂糖珠在S1P的检测和分析中具有广泛的应用潜力。它可以用于：

从细胞培养上清或生物体液中提取S1P。

研究S1P与其受体的相互作用。

作为药物筛选和开发的工具，评估S1P受体激动剂或拮抗剂的活性。

S1P 琼脂糖珠操作流程

使用S1P 琼脂糖珠进行实验通常包括以下步骤：

样品准备：收集并处理细胞培养上清或生物体液。

结合S1P：将样品与S1P 琼脂糖珠混合，允许S1P与珠结合。

洗涤和分离：去除未结合的物质，分离出结合S1P的珠。

检测和分析：利用质谱、ELISA或其他检测方法分析结合的S1P。

脂质珠^TM测定注意事项：

脂质包被珠有1 mL和0.1 mL两种规格，以1X PBS缓冲液中的50%浆液形式提供。

订购1 mL的产品会附带200 ?L的对照珠。对照珠也可单独购买，建议使用它们进行分析。

储存在2-8°C。产品对温度和光线敏感，请勿冷冻。

以1,000 x g或更低的速度离心珠。不要高速离心珠，因为这可能会压碎珠。

每1 mL珠中有总计10毫摩尔的结合脂质。

珠的直径范围在45-165微米之间。

对每种蛋白质使用50-100 ?L的50%浆液脂质包被珠和对照珠。

了解阳性对照蛋白列表。

脂质珠^TM - 蛋白质拉下协议：

我们提供以下协议作为指南，并强烈鼓励研究人员查阅科学文献并进行优化实验，以确定对其感兴趣的蛋白质最有利的条件。

充分混合珠（不要涡旋）。将50-100 ?L的50%珠浆液转移到0.5-1.5 mL的管中。

以1,000 x g或更低的速度离心珠以沉淀。小心移除上清液，避免丢失珠。

用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤两次。

小心移除洗涤上清液，并将珠在含有您的蛋白质的结合缓冲液中重新悬浮。 a. 对于纯化的蛋白质，使用1-10 ?g的蛋白质，用足够的结合缓冲液稀释形成50%脂质珠浆液。 b. 对于细胞裂解物、提取物、亚细胞组分：使用大约1 mg的总蛋白质对1 mL结合缓冲液。将整个1 mL准备好的样品加入到您洗涤过的珠中。

将蛋白质-珠溶液孵育1-3小时。孵育可以在室温或4°C下进行，取决于您蛋白质的稳定性。需要连续运动以保持珠悬浮。

沉淀珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用来监测未结合的蛋白质。

用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤五次。如果您选择在结合缓冲液中使用牛血清白蛋白（BSA），请确保在进入下一步之前将其彻底洗出。

在最后一次洗涤后，通过向珠中加入等体积的2X Laemmli样品缓冲液（或类似物）并加热至70°C 10分钟来洗脱结合的蛋白质。

加热后，沉淀珠并移除上清液。将上清液储存在4°C下，直到分析。丢弃珠。

蛋白质可以通过SDS-PAGE分离，并通过凝胶的Coomassie蓝染色、蛋白质转移和免疫印迹检测感兴趣的蛋白质，或进行自显影。

文献参考：

1) N. C. Hait, J. Allegood, et al. (2009) “Regulation of histone acetylation in the nucleus by sphingosine-1-phosphate” Science 325(5945), 1254-7

2) G. M. Strub, M. Paillard, et al. (2011) “Sphingosine-1-phosphate produced by sphingosine kinase 2 in mitochondria interacts with prohibitin 2 to regulate complex IV assembly and respiration” The FASEB Journal 25(2), 600-612 10.1096/fj.10-167502

3) E.-S. Park, S. Choi, et al. (2015) “Tumor Necrosis Factor (TNF) Receptor-associated Factor (TRAF)-interacting Protein (TRIP) Negatively Regulates the TRAF2 Ubiquitin-dependent Pathway by Suppressing the TRAF2-Sphingosine 1-Phosphate (S1P) Interaction” J. Biol. Chem. 290(15), 9660-9673 10.1074/jbc.M114.609685

4) Parham, K. A., et al. (2015). “Sphingosine 1-phosphate is a ligand for peroxisome proliferator-activated receptor-γ that regulates neoangiogenesis.” The FASEB Journal 29(9): 3638-3653.

Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。