Biogradetech Sphingomyelin 琼脂糖珠：在鞘磷脂研究中的应用

脂质包被珠被设计用于蛋白质下拉实验。用于检测纯化蛋白质、细胞裂解物中蛋白质的脂质结合，或放射性标记的体外翻译产物的结合。

鞘磷脂珠由琼脂糖组成，每1mL珠含有10纳摩尔的结合鞘磷脂，足以进行几次蛋白质结合实验。每1mL订单包括少量对照珠。更多数量的控制珠也可供购买。

作为Biogradetech独家代理，艾美捷科技强烈推荐Biogradetech热销产品 Sphingomyelin 琼脂糖珠。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

鞘磷脂是一种重要的生物脂质，广泛存在于细胞膜中，参与多种细胞生理过程。琼脂糖珠是一种常用于分子生物学实验的工具，用于DNA、RNA和蛋白质的分离和纯化。Sphingomyelin 琼脂糖珠通过将鞘磷脂分子固定在琼脂糖珠表面来制备。这种固定可以是通过共价键或非共价相互作用实现的。制备好的珠粒具有高度的特异性和亲和力，能够高效地从复杂样品中捕获鞘磷脂分子。

脂质珠TM测定注意事项：

脂质包被珠有1 mL和0.1 mL两种规格，以1X PBS缓冲液中的50%浆液形式提供。

订购1 mL的产品会附带200 ?L的对照珠。对照珠也可单独购买，建议使用它们进行分析。

储存在2-8°C。产品对温度和光线敏感，请勿冷冻。

以1,000 x g或更低的速度离心珠。不要高速离心珠，因为这可能会压碎珠。

每1 mL珠中有总计10毫摩尔的结合脂质。

珠的直径范围在45-165微米之间。

对每种蛋白质使用50-100 ?L的50%浆液脂质包被珠和对照珠。

了解阳性对照蛋白列表。

脂质珠^TM - 蛋白质拉下协议：

我们提供以下协议作为指南，并强烈鼓励研究人员查阅科学文献并进行优化实验，以确定对其感兴趣的蛋白质最有利的条件。

充分混合珠（不要涡旋）。将50-100 ?L的50%珠浆液转移到0.5-1.5 mL的管中。

以1,000 x g或更低的速度离心珠以沉淀。小心移除上清液，避免丢失珠。

用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤两次。

小心移除洗涤上清液，并将珠在含有您的蛋白质的结合缓冲液中重新悬浮。 a. 对于纯化的蛋白质，使用1-10 ?g的蛋白质，用足够的结合缓冲液稀释形成50%脂质珠浆液。 b. 对于细胞裂解物、提取物、亚细胞组分：使用大约1 mg的总蛋白质对1 mL结合缓冲液。将整个1 mL准备好的样品加入到您洗涤过的珠中。

将蛋白质-珠溶液孵育1-3小时。孵育可以在室温或4°C下进行，取决于您蛋白质的稳定性。需要连续运动以保持珠悬浮。

沉淀珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用来监测未结合的蛋白质。

用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤五次。如果您选择在结合缓冲液中使用牛血清白蛋白（BSA），请确保在进入下一步之前将其彻底洗出。

在最后一次洗涤后，通过向珠中加入等体积的2X Laemmli样品缓冲液（或类似物）并加热至70°C 10分钟来洗脱结合的蛋白质。

加热后，沉淀珠并移除上清液。将上清液储存在4°C下，直到分析。丢弃珠。

蛋白质可以通过SDS-PAGE分离，并通过凝胶的Coomassie蓝染色、蛋白质转移和免疫印迹检测感兴趣的蛋白质，或进行自显影。

文献参考：

1) Nair, S., et al. (2016). “Clonal Immunoglobulin against Lysolipids in the Origin of Myeloma.” New England Journal of Medicine 374(6): 555-561.

Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。