Biogradetech PtdIns 琼脂糖珠的作用及在琼脂糖珠纯化中的应用

脂质包被珠被设计用于蛋白质下拉实验。用于检测纯化蛋白质、细胞裂解物中蛋白质的脂质结合，或放射性标记的体外翻译产物的结合。

PtdIns珠由琼脂糖组成，每毫升珠含有10纳摩尔的结合PtdIns，足以进行几次蛋白质结合实验。每1mL珠粒包括少量对照珠粒。更多数量的控制珠也可供购买。

作为Biogradetech独家代理，艾美捷科技强烈推荐Biogradetech热销产品 PtdIns 琼脂糖珠。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

磷脂酰肌醇(PtdIns)是细胞膜中的关键组成部分，对细胞信号传导至关重要。本文旨在探讨PtdIns在细胞信号传导中的作用，并分析其在利用琼脂糖珠进行生物分子纯化过程中的应用。

PtdIns在细胞信号传导中的作用

PtdIns通过其磷酸化形式，如PtdIns(4,5)P2，参与细胞内钙离子的调控、细胞骨架的重组以及细胞增殖等多种生理过程。PtdIns的磷酸化状态受到多种激酶和磷酸酶的调控，这些酶的活性变化直接影响细胞的生理反应。

琼脂糖珠在生物分子纯化中的应用

琼脂糖珠是一种多孔的凝胶颗粒，常用于DNA、RNA和蛋白质的提取和纯化。它们具有高吸附容量和良好的生物相容性，是分子生物学实验中不可或缺的工具。

PtdIns与琼脂糖珠的结合应用

在某些特定的实验中，PtdIns可以与琼脂糖珠结合，用于特定的生物分子的富集和纯化。例如，在研究PtdIns相关信号通路时，可以通过琼脂糖珠富集特定的PtdIns结合蛋白，进而分析其功能和作用机制。

PtdIns在细胞信号传导中扮演着重要角色，而琼脂糖珠作为一种有效的纯化工具，可以帮助科学家更好地理解和研究PtdIns的功能。未来，随着技术的发展，PtdIns与琼脂糖珠的结合应用将为细胞生物学和分子生物学研究提供更多的可能性。

脂质珠 - 蛋白质协议：

我们提供以下协议作为指南，并强烈鼓励研究人员查阅科学文献并进行优化实验，以确立对其感兴趣的蛋白质z有利的条件。

充分混合珠（不要使用涡旋）。将50 – 100 微升的50%珠悬液转移到0.5 – 1.5 毫升的管中。

以1000 x g或更低的速度离心珠。小心移除上清液，避免丢失珠。

用10倍过量的洗涤缓冲液洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤两次。

小心移除洗涤上清液，并将珠在含有您的蛋白质的结合缓冲液中重新悬浮。 a. 对于纯化的蛋白质，使用1-10 微克的蛋白质，用足够的结合缓冲液稀释形成50%脂质珠悬液。 b. 对于细胞裂解物、提取物、亚细胞组分：使用大约1 毫克的总蛋白质对1 毫升结合缓冲液。将整个1毫升的制备样品加入到您洗涤过的珠中。

孵育蛋白质-珠溶液1-3小时。孵育可以在室温或4°C下进行，取决于您蛋白质的稳定性。需要连续运动以保持珠悬浮。

离心珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用来监测未结合的蛋白质。

用10倍过量的洗涤缓冲液洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤五次。如果您选择在结合缓冲液中使用牛血清白蛋白（BSA），请确保在进行下一步之前将其彻底洗出。

在最后一次洗涤后，通过向珠中加入等体积的2X Laemmli样品缓冲液（或类似物）并加热至70°C 10分钟来洗脱结合的蛋白质。

加热后，离心珠并移除上清液。将上清液储存在4°C下，直到分析。丢弃珠。

蛋白质可以通过SDS-PAGE分离，并通过凝胶的Coomassie蓝染色、蛋白质转移和免疫印迹来检测感兴趣的蛋白质，或进行自显影。

文献参考：

1. Gálvez-Santisteban, M., Rodriguez-Fraticelli, A. and Martin-Belmonte, F. (2014). Phosphoinositides Coated Beads Binding Assay. Bio-protocol 4(3): e1039. 

Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。