Biogradetech PI(3,4,5)P3 琼脂糖珠：探索细胞信号传导的关键工具

脂质包被珠被设计用于蛋白质下拉实验。用于检测纯化蛋白质、细胞裂解物中蛋白质的脂质结合，或放射性标记的体外翻译产物的结合。

PI（3,4,5）P3珠由琼脂糖组成，每毫升珠含有10纳摩尔的结合PI（3,4-5）P2，足以进行几次蛋白质结合实验。每1mL珠粒包括少量对照珠粒。更多数量的控制珠也可供购买。

作为Biogradetech独家代理，艾美捷科技强烈推荐Biogradetech热销产品PI(3,4,5)P3 琼脂糖珠。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

脂质珠 - 蛋白质协议：

我们提供以下协议作为指南，并强烈鼓励研究人员查阅科学文献并进行优化实验，以确立对其感兴趣的蛋白质z有利的条件。

充分混合珠（不要使用涡旋）。将50 – 100 微升的50%珠悬液转移到0.5 – 1.5 毫升的管中。

以1000 x g或更低的速度离心珠。小心移除上清液，避免丢失珠。

用10倍过量的洗涤缓冲液洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤两次。

小心移除洗涤上清液，并将珠在含有您的蛋白质的结合缓冲液中重新悬浮。 a. 对于纯化的蛋白质，使用1-10 微克的蛋白质，用足够的结合缓冲液稀释形成50%脂质珠悬液。 b. 对于细胞裂解物、提取物、亚细胞组分：使用大约1 毫克的总蛋白质对1 毫升结合缓冲液。将整个1毫升的制备样品加入到您洗涤过的珠中。

孵育蛋白质-珠溶液1-3小时。孵育可以在室温或4°C下进行，取决于您蛋白质的稳定性。需要连续运动以保持珠悬浮。

离心珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用来监测未结合的蛋白质。

用10倍过量的洗涤缓冲液洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤五次。如果您选择在结合缓冲液中使用牛血清白蛋白（BSA），请确保在进行下一步之前将其彻底洗出。

在最后一次洗涤后，通过向珠中加入等体积的2X Laemmli样品缓冲液（或类似物）并加热至70°C 10分钟来洗脱结合的蛋白质。

加热后，离心珠并移除上清液。将上清液储存在4°C下，直到分析。丢弃珠。

蛋白质可以通过SDS-PAGE分离，并通过凝胶的Coomassie蓝染色、蛋白质转移和免疫印迹来检测感兴趣的蛋白质，或进行自显影。

文献参考：

1) Hiromura, M., F. Okada, et al. (2004). “Inhibition of Akt kinase activity by a peptide spanning the betaA strand of the proto-oncogene TCL1.” J Biol Chem 279(51): 53407-18.

2) Craig, H. E., J. Coadwell, et al. (2010). “ARAP3 binding to phosphatidylinositol-(3,4,5)-trisphosphate depends on N-terminal tandem PH domains and adjacent sequences.” Cellular Signalling 22(2): 257-264.

3) Takahashi, K. and K. Suzuki (2010). “WAVE2 targeting to phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate mediated by insulin receptor substrate p53 through a complex with WAVE2.” Cellular Signalling 22(11): 1708-1716.

4) Gálvez-Santisteban, M., Rodriguez-Fraticelli, A. and Martin-Belmonte, F. (2014). Phosphoinositides Coated Beads Binding Assay. Bio-protocol 4(3): e1039. http://www.bio-protocol.org/e1039

5) Barrows, D., et al. (2016). “PREX1 Protein Function is Negatively Regulated Downstream of Receptor Tyrosine Kinase Activation by p21-activated Kinases (PAKs).” The Journal of biological chemistry 291: 20042-20054.

6) Lin, A., et al. (2017). “The LINK-A lncRNA interacts with PtdIns(3,4,5)P3 to hyperactivate AKT and confer resistance to AKT inhibitors.” Nat Cell Biol 19(3): 238-251.

7) Hawse, W. F. and R. T. Cattley (2019). “T cells transduce T-cell receptor signal strength by generating different phosphatidylinositols.” J Biol Chem 294(13): 4793-4805.

Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。