以下酶免疫测定测试的原理遵循典型的竞争性结合场景。竞争发生在未标记的抗原(存在于标准品、对照品和样品中)和酶标记的抗原(缀合物)用于微孔板上有限数量的抗体结合位点。这个洗涤和倾析程序去除未结合的材料。在洗涤步骤之后,将酶底物补充。通过加入终止溶液终止酶促反应。测量吸光度我们的微量滴定板阅读器。所形成的颜色的强度与样品中的孕烯醇酮。标准一组标准用于绘制标准曲线样品和对照中的孕烯醇酮可以直接读取。
艾美捷人孕烯醇酮ELISA Kit(BGT-KET-150):用于通过酶免疫测定法直接定量测定人血清中的孕烯醇酮。
局限性:
1. 试剂盒内的所有试剂均已校准,仅用于直接测定人血清中的孕烯醇。试剂盒未校准用于测定唾液、血浆或其他人源或动物源样本中的孕烯醇。
2. 不要使用明显溶血、明显脂血、黄疸或储存不当的血清。
3. 任何含有叠氮化物或硫柳汞的样本或对照血清与本试剂盒不兼容,因为它们可能导致虚假结果。
4. 只有标准A可用于稀释任何高血清样本。使用任何其他试剂可能导致虚假结果。
安全警告和注意事项:
潜在的生物危害材料:
用于制备标准品和对照品的人血清已经过测试,发现对乙型肝炎表面抗原无反应,并且已经测试了是否存在对丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)的抗体,结果为阴性。然而,没有任何测试方法可以提供完全保证HIV、HCV和乙型肝炎病毒或任何传染性因子的缺失。试剂应被视为潜在的生物危害,并以与任何血液样本相同的预防措施进行处理。
化学危害:
避免与含有TMB(四甲基联苯胺)、过氧化氢和硫酸的试剂接触。如果接触到这些试剂中的任何一种,请用大量水冲洗。TMB是可疑致癌物。
样本收集与储存:
每次重复测定需要大约0.2毫升的血清。将4-5毫升血液收集到适当标记的试管中并让其凝固。离心后小心移除血清层。如果分析将在稍后进行,可将其储存在4°C下最多24小时,或储存在-10°C或更低的温度下。将所有人源样本视为可能的生物危害材料,并在处理时采取适当的预防措施。
样本预处理:
该测定是直接系统;不需要样本预处理。
所需但未提供的试剂和设备:
1. 用于分配50、100、150和300微升的精密移液管
2. 一次性移液管尖
3. 蒸馏水或去离子水
4. 板式摇动器
5. 带有450纳米滤光片和3.0或更高上OD限的微孔板阅读器。
计算方法:
计算每个标准品重复样本的平均光密度。
在半对数坐标纸上绘制标准曲线,平均光密度在Y轴上,标准品浓度在X轴上。如果使用免疫分析软件,建议使用4参数或5参数曲线。
计算每个未知样本重复测定的平均光密度。
直接从标准曲线上读取未知样本的数值。
如果样本测定结果超过25.6纳克/毫升,则应使用标准A进行稀释,稀释度不超过1:8。所得结果应乘以稀释倍数。
典型标准曲线:
这仅是一个样本曲线,不要用来计算结果。
灵敏度:下限检测限是通过标准曲线计算得出的,计算方法是确定标准A的平均OD(光密度,基于10次重复分析)的浓度减去2倍SD(标准差)。因此,孕烯醇ELISA试剂盒的灵敏度为0.05纳克/毫升。
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