在双抗体夹心ELISA测定中,样品中存在的IgM与已吸附在聚苯乙烯微量滴定池表面的抗IgM抗体反应。在通过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)缀合的抗IgM抗体。这些酶标记的抗体与先前结合的IgM形成复合物。在另一个洗涤步骤之后,通过添加无色底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)来测定与免疫吸附结合的酶。结合酶的数量与所测试样品中IgM的浓度直接相关;因此,在450nm处的吸光度是测试样品中IgM浓度的测量值。试验样品中IgM的量可以根据标准曲线进行插值,并根据样品稀释度进行校正。
艾美捷BGT-IgM (鸡) ELISA Kit:
货号:BGT-KET-131
抗体类型:酶联免疫吸附测定(ELISA)
宿主:山羊
特异性/靶标:免疫球蛋白M(IgM)
规格:1.0
检测范围:3.125 ng/ml - 200 ng/ml
灵敏度:0.979 ng/ml
测定时间:70 分钟
样本类型:血浆、血清
储存条件:2-8°C
IgM检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法(ELISA),用于测量鸡生物样品中的IgM。如果ELISA在预期用途之外使用,用户可能需要优化saiduse。
样品收集和处理:
所有血液组分和生物材料应被视为潜在的危险物质。在处理和处置时,应遵循通用预防措施。如果血样出现凝血、严重溶血、脂血,或者样本的完整性受到质疑,请做好记录并谨慎解释结果。下面列出的样品收集和储存条件是一般性指导。尚未评估样本的稳定性。
血清样本 - 应通过静脉穿刺采集血液。血液凝固后,应通过离心分离血清。取出血清并立即检测,或分装样本并储存在-80°C或-20°C。避免反复冻融。
血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中,然后进行离心。立即检测或分装样本并储存在-80°C或-20°C。避免反复冻融。
尿液样本 - 使用无菌或干净的尿液收集器收集中段尿。离心以去除细胞碎片。立即检测或分装样本并储存在-80°C或-20°C。避免反复冻融。
已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。
样品稀释:
在使用前,该检测要求每个待测样本都要进行稀释。每次进行检测时,所有样本都应以双份进行检测。推荐的稀释度仅供参考。稀释度应基于未知样本的预期浓度,以便稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本水平,在运行整个板之前,强烈建议对一个或两个代表性样本进行系列稀释。
血清样本 - 推荐的起始稀释度为1/2,000。要准备1/2,000的样本稀释液,将5微升的样本转移到495微升的1X稀释液中。这将得到1/100的稀释度。接下来,通过将20微升的1/100稀释液转移到380微升的1X稀释液中来稀释1/100,这将得到1/2,000的稀释度。每个阶段都要彻底混合。
血浆样本 - 推荐的起始稀释度为1/2,000。要准备1/2,000的样本稀释液,将5微升的样本转移到495微升的1X稀释液中。这将得到1/100的稀释度。接下来,通过将20微升的1/100稀释液转移到380微升的1X稀释液中来稀释1/100,这将得到1/2,000的稀释度。每个阶段都要彻底混合。
试剂准备:
使用前将所有试剂预热至室温(16°C至25°C)。
稀释液浓缩液 提供的稀释液溶液是5倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,4份dH2O)稀释1/5。
洗涤液浓缩液 提供的洗涤液是20倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,19份dH2O)稀释1/20。如果储存温度较低,浓缩液中可能会形成晶体。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。
酶-抗体结合物 通过向990微升1X稀释液中添加10微升酶-抗体结合物来计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释,并避光保存。均匀混合,但要轻柔。避免产生泡沫。
预包被的ELISA微孔板 按提供的状态使用即可。打开铝箔袋,从袋中取出板。取出在检测中不会使用的条和孔,放回袋中并重新密封,同时放回干燥剂。
鸡IgM校准物 根据批次特定的分析证书进行准备。
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