DPP4抑制剂筛选试剂盒，基于荧光法，助力糖尿病治疗研究

DPP（IV）抑制剂已成为一类新的口服抗糖尿病药物。这些抑制剂通过抑制DPP对葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（GIP）和胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的降解来促进葡萄糖稳态（IV）。GLP-1延长胰岛素的作用，同时抑制胰高血糖素的释放。

Biogradetech的DPP4抑制剂筛选试剂盒（BGT-KAT-100）提供了一种方便的基于荧光的方法，用于以96孔形式筛选DPP（Ⅳ）抑制剂。

艾美捷Biogradetech-DPP4抑制剂筛选试剂盒提供了一种方便的基于荧光的方法来筛选DPP（Ⅳ）抑制剂。该测定使用荧光底物Gly-Pro氨基甲基香豆素（AMC）来测量DPP（IV）的活性。DPP对肽键的切割释放出游离的AMC基团，产生的荧光可以使用350-360nm的激发波长和450-465nm的发射波长进行分析。

DPP4抑制剂筛选试剂盒样本数据：

此处显示的数据是该试剂盒通常产生的数据示例；但是，您的结果将与这些结果不完全相同。不要使用以下数据直接与您的样本进行比较。你的结果可能会有很大的不同。

西格列汀对DPP（IV）的抑制作用。“Veh.”表示100%的初始活动。基质浓度-100μM。IC50=14.4 nM

试剂准备：

1. DPP检测缓冲液（10X）

此小瓶含有5毫升10倍浓缩的缓冲液。将3毫升检测缓冲液浓缩液与27毫升HPLC级水混合稀释。最终得到的缓冲液（最终浓度为20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 含有100 mM NaCl和1 mM EDTA）应用于检测以及稀释试剂。在-20°C储存时，稀释后的缓冲液至少稳定六个月。

2. DPP（IV）（人类重组）

每个小瓶含有120微升人类重组DPP（IV）。在冰上解冻酶，向小瓶中加入480微升稀释后的检测缓冲液，并轻轻混合。稀释后的酶在冰上稳定两小时。一个小瓶的酶足以检测60个孔。如果检测整个板，请使用额外的小瓶。

3. DPP底物

此小瓶含有300微升5 mM的H-Gly-Pro与氨基甲基香豆素（AMC）偶联。将120微升与2.88毫升稀释后的检测缓冲液混合并涡旋混合。这将足够60个孔的底物溶液。根据需要准备额外的底物。底物溶液在室温下稳定六小时。向检测中添加50微升，最终浓度为100 ?M底物。注意：肽的Km值为17.4 ?M。根据用户的判断，特别是在检测竞争性抑制剂（包括西他列汀阳性对照抑制剂）时，可以通过用检测缓冲液稀释来降低检测中的底物浓度。

4. 西他列汀阳性对照抑制剂

此小瓶含有500纳摩尔的抑制剂。用500微升稀释后的检测缓冲液重新悬浮以制备1 mM的库存溶液。向检测中添加10微升，孔中最终浓度为100 μM抑制剂。

DPP4抑制剂筛选试剂盒文献参考：

1. Morimoto, C., Lord, C.I., Zhang, C., et al. Role of CD26/dipeptidyl peptidaseIV in human immunodeficiency virus type 1 infection and apoptosis. Proc.Nat Acad. Sci. USA 91, 9960-9964 (1994).

2. Fleischer, B. CD26: A surface protease involved in T-cell activation.Immunology Today 15(4), 180-184 (1994).

3. Heike, M., M?bius, U., Knuth, A., et al. Tissue distribution of the T cellactivation antigen Ta1. Serological, immunohistochemical and biochemicalinvestigations. Clin. Exp. Immunol. 74, 431-434 (1988).

4. Durinx, C., Lambeir, A.-M., Bosmans, E., et al. Molecular characterization ofdipeptidyl peptidase activity in serum. Soluble CD26/dipeptidyl peptidaseIV is responsible for the release of X-Pro dipeptides. Eur. J. Biochem 267,5608-5613 (2000).

5. Lambeir, A.-M., Pereira, J.F.D., Chacón, P. , et al. A prediction of DPP IV/CD26 domain structure from a physico-chemical investigation of dipeptidylpeptidase IV (CD26) from human seminal plasma. Biochim. Biophys. Acta1340, 215-226 (1997).

6. Mentlein, R. Dipeptidyl-peptidase IV (CD26)-role in the inactivation ofregulatory peptides. Regul. Pept. 85, 9-24 (1999).

7. Langley, A.K., Suffoletta, T.J., and Jennings, H.R. Dipeptidyl peptidaseIV inhibitors and the incretin system in type 2 Diabetes Mellitus.Pharmacotherapy 27, 1163-1180 (2007).

8. Doupis, J. and Veves, A. DPP4 inhibitors: A new approach in diabetestreatment. Advances in Therapy 25(7), 627-643 (2008).

9. Kikkawa, F., Kajiyama, H., Shibata, K., et al. Dipeptidyl peptidase IV in tumorprogression. Biochim. Biophys. Acta 1751, 45-51 (2005).

10. Havre, P.A., Abe, M., Urasaki, Y., et al. The role of CD26/dipeptidyl peptidaseIV in cancer. Frontiers in Bioscience 13, 1634-1645 (2008).

11. Zhang, J.-H., Chung, T.D.Y., and Oldenburg, K.R. A simple statisticalparameter for use in evaluation and validation of high throughput screeningassays. J. Biomol. Screen. 4(2), 67-73 (1999).