DPP4抑制剂筛选试剂盒的性能特征介绍和示例

Biogradetech-DPP4抑制剂筛选试剂盒（BGT-KAT-100）提供了一种方便的基于荧光的方法来筛选DPP（Ⅳ）抑制剂。该测定使用荧光底物Gly-Pro氨基甲基香豆素（AMC）来测量DPP（IV）的活性。DPP对肽键的切割释放出游离的AMC基团，产生的荧光可以使用350-360nm的激发波长和450-465nm的发射波长进行分析。

艾美捷DPP4抑制剂筛选试剂盒特点：

1、筛选DPP (IV)抑制剂

2、可对46个样本进行双重测定

3、包含阳性对照抑制剂

4、基于板的荧光测量（激发波长530-540纳米，发射波长585-595纳米）

DPP4抑制剂筛选试剂盒性能特征：

Z'因子是一个用来描述检测方法稳健性的术语，它是通过使用下面的公式计算得出的。

Z? = 1 -（3σc+ + 3σc-）/丨?c+ - ?c-丨

Where σ: Standard deviation

?: Mean

c+: Posive control

c-: Negative control

Z'因子的理论上限为1.0。一个稳健的检测方法其Z'因子应大于0.5。Cayman的DPP (IV)抑制剂筛选试剂盒的Z'因子被确定为0.96。

DPP4抑制剂筛选试剂盒示例数据：

DPP (IV)抑制剂筛选试剂盒的典型Z'数据。数据显示了按照试剂盒手册中描述准备的阳性和阴性对照孔的数据。此次实验计算出的Z'因子为0.96。红色线条对应于每个对照值的平均值偏差的三个标准差。

基本信息：

1、所有孔的最终检测体积为100微升。

2、在检测中使用稀释后的检测缓冲液。

3、除了酶之外，所有试剂在开始检测前必须平衡至室温。

4、没有必要一次使用板上的所有孔。

5、建议以三重复进行样本检测，但是否这样做取决于用户的判断。

6、检测在37°C下进行。

7、如果不知道适当的抑制剂浓度，可能需要在几个稀释度下进行检测。可以进行每个抑制剂的稀释系列，以确定IC50值。

8、三十个抑制剂样本可以进行三重复检测，或者四十五个样本进行双重复检测。

9、使用激发波长为350-360纳米和发射波长为450-465纳米的荧光监测。

执行检测：

1.初始活性孔 - 在三个孔中分别加入30微升稀释的检测缓冲液、10微升稀释的DPP (IV)和10微升溶剂（用于溶解抑制剂的相同溶剂）。

2.背景孔 - 在三个孔中分别加入40微升稀释的检测缓冲液和10微升溶剂（用于溶解抑制剂的相同溶剂）。

3.西他列汀阳性对照抑制剂孔 - 在三个孔中分别加入30微升稀释的检测缓冲液、10微升稀释的DPP和10微升西他列汀阳性对照抑制剂。

4.抑制剂孔 - 在三个孔中分别加入30微升稀释的检测缓冲液、10微升稀释的DPP (IV)和10微升抑制剂。注意：抑制剂可以溶解在检测缓冲液或二甲亚砜中，并且应以10微升的最终体积加入到检测中。乙醇和甲醇会大幅降低酶活性，因此不推荐用于溶解抑制剂。如果完全不知道需要抑制DPP (IV)的适当浓度，我们建议检测该化合物的几个浓度。

5.启动反应 - 向所有使用的孔中各加入50微升稀释的底物溶液。

6.盖板孵育 - 用板盖盖住板子，并在37°C下孵育30分钟。

7. 读取荧光 - 去掉板盖，并使用激发波长为350-360纳米和发射波长为450-465纳米的荧光读取。可能需要调整仪器的增益设置，以便测量所有样本。

*为了确定反应速率和表观IC50值，我们建议以动力学方式读取样本，在30分钟检测读取时间内收集尽可能多的时间点。基于动力学曲线的线性部分确定初始速率。可以通过用荧光代替，按照以下所示进行计算。

% Inhibition =【{Inial Acvity - Inhibitor}/ Inial Acvity 】x 100