高吞吐量NADP/NADPH 检测试剂盒

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotidephosphate，简称NADP）与NAD的不同之处只在于其分子有一个额外的磷酸基，NADPH是它的还原形式。NADP+参与生物合成反应，如脂质和核酸的合成。在动物细胞中，戊糖磷酸途径的氧化阶段是NADPH的极重要来源。NADP/NADPH的定量测定在细胞或组织的能量转化和氧化还原状态的研究中具有重要应用价值。

艾美捷 NADP/NADPH 检测试剂盒（荧光法）：

目录代码：BA0107

包装尺寸：100assays

仅供研究使用

NADP/NADPH 检测试剂盒应用程序

直接测定：细胞或组织提取物中NADP’/NADPH的浓度和比率。

NADP/NADPH 检测试剂盒主要功能：

1、灵敏准确。96孔板法检测限为0.01μM，线性高达1μM NADP+/NADPH。实用的该程序包括添加一种工作试剂，并在时间0和30读取荧光

Zui低室温测定。

2、高吞吐量。可作为每天数千个样品的高通量96孔板法容易地自动化。

储存条件：这套装备是用冰块装运的。将所有试剂储存在20°C的温度下。保质期：收到后6个月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时，应采取实验室试剂的常规预防措施。有关详细信息，请参阅材料安全数据表。

一般注意事项：

1.在这些浓度下，NADP’和NADPH的标准曲线是相同的。由于溶液中的NADPH不稳定，我们只提供NADP作为标准。

2.该测定基于酶催化的动力学反应。工作试剂的添加应迅速，混合应简短但彻底。建议使用多通道移液器。

3.以下物质会干扰样品制备，应避免使用。EDTA（>0.5 mM）、抗坏血酸、SDS（>0.2%）、叠氮化钠、NP-40（>1%）和Tween-20（+1%）。

程序

1.样品制备。对于每个样品重量约为20 mg的组织，用冷PBS清洗。对于细胞样品，用冷PBS洗涤细胞，每个样品用约105个细胞沉淀。将样品（组织或细胞）在1.5 mL Eppendorftube中用100μL NADP提取缓冲液（用于NADP测定）或100μL NADPH提取缓冲液均匀化（用于NADPH测定）。将提取物在60°C下加热5分钟，然后加入20μL测定缓冲液和100μL反向提取缓冲液以中和提取物。短暂涡旋并以14000rpm旋转样品5分钟。使用上清液进行NADP’/NADPH测定。NADP+和NADPH浓度的测定需要从两个单独的样品中提取。

2.校准曲线。准备500mL 1?M NADP+预混物，混合5mL 1mM标准和4995mL蒸馏水。稀释标准品如下：

3.样品。在单独的孔中，每孔添加50μL样品。

4.试剂制备。对于每个反应井，通过混合40μL测定缓冲液、1μL酶A、1μL-酶B、10μL葡萄糖和5μL探针来制备工作试剂。建议重新配制。

5.反应。每孔快速加入50μL工作试剂。轻敲盘子搅拌。

6.在室温下孵育30分钟后，在λev/em=530/585 nm下读取时间“零”（Fo）和F3o的荧光。在培养过程中，请保护培养板免受光照。

文献参考：

1.Zhao, Z, Hu, X and Ross CW (1987). Comparison of Tissue Preparation Methods for Assay of Nicotinamide Coenzymes.Plant Physiol.84:987-988.

2.Matsumura, H. and Miyachi S (1980). Cycling assay for nicotinamide adenine dinucleotides. Methods Enzymol. 69:

465-470.

3. Vilcheze, C et al.(2005). Altered NADH/NAD+ Ratio Mediates Coresistance to lsoniazid and Ethionamide inMycobacteria. Antimicrobial Agents and Chemotherapy.49(2): 708-720.

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